[发明专利]检测蓝舌病病毒、动物流行性出血病病毒和帕利亚姆病毒的RT-LAMP引物组及试剂盒

说明书

本发明涉及一种检测蓝舌病病毒、动物流行性出血病病毒和帕利亚姆病毒的RT‑LAMP引物组及试剂盒，包括引物组Ι、引物组Ⅱ和引物组Ⅲ；引物组I由BTV‑F3、BTV‑B3、BTV‑FIP、BTV‑BIP、BTV‑LB和BTV‑LF组成；引物组II由EHDV‑F3、EHDV‑B3、EHDV‑FIP、EHDV‑BIP、EHDV‑LB和EHDV‑LF组成；引物组III由PALV‑F3、PALV‑B3、PALV‑FIP、PALV‑BIP和PALV‑LF组成。本发明RT‑LAMP检测方法具有高特异性和灵敏度，可快速、准确的检测出BTV、EHDV和PALV，具有重大的推广价值。

技术领域

本发明属于兽医传染病检测技术领域，特别涉及用于可视化检测蓝舌病病毒、动物流行性出血病病毒和帕利亚姆病毒的RT-LAMP引物组及试剂盒。

背景技术

蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)、动物流行性出血病病毒(Epizootichaemorrhagic disease virus,EHDV)与帕利亚姆病毒(Palyam virus,PALV)均为库蠓传播的反刍动物虫媒病毒，属于呼肠孤病毒科环状病毒属成员。BTV、EHDV与PALV的基因组均由10个节段(Seg-1～Seg-10)的双链RNA(Double stranded RNA,dsRNA)组成，大小约20kb，在遗传进化上具有较近的亲缘关系。

BTV感染绵羊可引起明显的临床症状，表现为高热、消瘦、口唇充血肿胀及糜烂、鼻腔和胃肠黏膜出血溃疡、蹄冠脱落引起跛行等；当新血清型BTV传入时，感染绵羊的发病率可达80％，死亡率高达40％，严重影响牛羊畜产品的正常国际贸易，给牛羊养殖业造成巨大的经济损失，因此世界动物卫生组织(Office international des epizooties,OIE)将BT列为法定报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。EHDV对鹿和牛具有较强的致病性，临床症状主要表现为：体温升高、休克、口腔与皱胃黏膜发生出血与糜烂、蹄冠出血和跛行，妊娠期动物出现流产或死胎，奶牛或哺乳期动物产奶量急剧减少，因此，EHD被OIE列为法定报告的跨境动物疫病。PALV感染牛羊等反刍动物，可引起妊娠期家畜出现生产异常，表现为流产、死胎或脑组织发育不全的畸形胎等。

我国幅员辽阔，自然气候条件复杂多样，媒介昆虫活动范围广，牛羊养殖遍及全国各地，为牛羊虫媒病毒的流行传播提供了有利条件。目前世界范围确认了27种BTV血清型(BTV-1～BTV-27)，我国存在其中12种血清型BTV(BTV-1、-2、-3、-4、-5、-7、-9、-12、-15、-16、-21与-24)的流行，主要分布于云南、广东、广西、江苏、湖南和新疆等省市。目前世界范围内共发现了9种血清型的EHDV(EHDV-1、-2、-4、-5、-6、-7、-8、-9和-10型)，我国存在EHDV-1、-5、-6、-7、-10等5种血清型毒株的流行，主要分布于云南、广东、广西和内蒙等省市。PALV在我国的流行范围遍及由南(海南)至北(内蒙)，由东(江苏)至西(新疆)的广泛区域流行，流行毒株包括中山病毒(Chuzan virus,CHUV)、Bunyip creek virus(BCV)与D’Aguilarvirus(DAV)等三种血清。BTV、EHDV及PALV在我国的广泛流行给我国牛羊养殖业的健康发展造成严重威胁。

BTV、EHDV及PALV的易感宿主一致，导致的临床症状也较为相似，且病毒间具有较近的遗传关系，因此十分有必要开发一种快速、准确的鉴别方法。目前针对BTV、EHDV及PALV，已建立了包括RT-PCR和qRT-PCR等多种核酸检测方法，但以上方法需要使用PCR仪等复杂昂贵的仪器，因此主要局限于实验室检测，无法实现现场快速检测。因此如何克服现有技术的不足是目前兽医传染病检测技术领域亟需解决的问题。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种用于可视化检测蓝舌病病毒、动物流行性出血病病毒和帕利亚姆病毒的RT-LAMP引物组及试剂盒。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：