[发明专利]检测蓝舌病病毒、动物流行性出血病病毒和帕利亚姆病毒的RT-LAMP引物组及试剂盒

权利要求书

1.检测蓝舌病病毒、动物流行性出血病病毒和帕利亚姆病毒的引物组，其特征在于：包括引物组Ι、引物组Ⅱ和引物组Ⅲ；

所述引物组I由引物BTV-F3、引物BTV-B3、引物BTV-FIP、引物BTV-BIP、引物BTV-LB和引物BTV-LF组成；

所述引物组II由引物EHDV-F3、引物EHDV-B3、引物EHDV-FIP、引物EHDV-BIP、引物EHDV-LB和引物EHDV-LF组成；

所述引物组III由引物PALV-F3、引物PALV-B3、引物PALV-FIP、引物PALV-BIP和引物PALV-LF组成；

核苷酸序列如表1所示；

表1

。

2.如权利要求1所述的检测蓝舌病病毒、动物流行性出血病病毒和帕利亚姆病毒的引物组，其特征在于：所述引物组Ⅰ中，BTV-F3、BTV-B3、BTV-FIP、BTV-BIP、BTV-LB和BTV-LF的摩尔比具体可为1：1：3：3：2：2；

所述引物组Ⅱ中，EHDV-F3、EHDV-B3、EHDV-FIP、EHDV-BIP、EHDV-LB和EHDV-LF的摩尔比具体可为1：1：4：4：3：3；

所述引物组Ⅲ中，PALV-F3、PALV-B3、PALV-FIP、PALV-BIP和PALV-LF的摩尔比具体可为1：1：4：4：3。

3.含有权利要求1或2所述检测蓝舌病病毒、动物流行性出血病病毒和帕利亚姆病毒的引物组的RT-LAMP试剂盒。

4.如权利要求3所述的RT-LAMP试剂盒，其特征在于，所检测的样品为分离培养的病毒、牛羊抗凝血液。

5.如权利要求3所述的RT-LAMP试剂盒，其特征在于，还包括：WarmStart LAMP 2×Master Mix和RNase-free 水。

6.如权利要求3所述的RT-LAMP试剂盒，其特征在于：

引物组I进行RT-LAMP扩增的反应体系为：WarmStart LAMP 2× Master Mix 12.5 μL、BTV-F3 1 μL、BTV-B3 1 μL、BTV-FIP 1 μL、BTV-BIP 1 μL、BTV-LF 1 μL、BTV-LB 1 μL，核酸模板2 μL，加入RNase-free 水补足至25 μL；反应体系中各引物的终浓度如下：0.2 μMBTV-F3、0.2 μM BTV-B3、0.6 μM BTV-FIP、0.6 μM BTV-BIP、0.4 μM BTV-LF、0.4 μM BTV-LB；

引物组Ⅱ进行RT-LAMP扩增的反应体系为：WarmStart LAMP 2× Master Mix 12.5 μL、EHDV-F3 1 μL、EHDV-B3 1 μL、EHDV-FIP 1 μL、EHDV-BIP 1 μL、EHDV-LF 1 μL、EHDV-LB1 μL，核酸模板2 μL，加入RNase-free 水补足至25 μL；反应体系中各引物的终浓度如下：0.2 μM EHDV-F3、0.2 μM EHDV-B3、0.8 μM EHDV-FIP、0.8 μM EHDV-BIP、0.6 μM EHDV-LF、0.6 μM EHDV-LB；

引物组Ⅲ进行RT-LAMP扩增的反应体系为：WarmStart LAMP 2× Master Mix 12.5 μL、PALV-F3 1 μL、PALV-B3 1 μL、PALV-FIP 1 μL、PALV-BIP 1 μL、PALV-LF 1 μL，核酸模板2 μL，加入RNase-free 水补足至25 μL；反应体系中各引物的终浓度如下：0.2 μM PALV-F3、0.2 μM PALV-B3、0.8 μM PALV-FIP、0.8 μM PALV-BIP、0.6 μM PALV-LF。

7.如权利要求3所述的RT-LAMP试剂盒，其特征在于：RT-LAMP扩增的反应程序为：64 ℃恒温45 min。