[发明专利]一种检测GII型诺如病毒的巢式PCR引物及其应用

权利要求书

1.一种检测GII型诺如病毒的巢式PCR引物，其特征在于，上游引物和下游引物分别含有如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述检测GII型诺如病毒的巢式PCR引物，其特征在于，上游引物和下游引物核苷酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。

3.一种检测GII型诺如病毒的RT-PCR引物，其特征在于，上游引物和下游引物分别含有如SEQ ID No.3和SEQ ID No.2所示核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述检测GII型诺如病毒的RT-PCR引物，其特征在于，上游引物和下游引物核苷酸序列分别如SEQ ID No.3和SEQ ID No.2所示。

5.一种用于检测GII型诺如病毒的引物组合，其特征在于，包括权利要求3或4所述的RT-PCR引物和权利要求1或2所述的巢式PCR引物。

6.一种检测GII型诺如病毒的试剂盒，其特征在于，含有权利要求1或2所述的巢式引物、权利要求3或4所述的RT-PCR引物或者权利要求5所述的引物组合。

7.权利要求1或2所述的巢式引物、权利要求3或4所述的RT-PCR引物、权利要求5所述的引物组合或者权利要求6所述的试剂盒在检测牡蛎中GII型诺如病毒方面的应用。

8.一种巢式PCR扩增方法，其特征在于，步骤包括：

(1)第一轮RT-PCR扩增：以牡蛎样品中提取的总RNA为模板，采用权利要求1或2所述的RT-PCR引物进行扩增；

(2)第二轮巢式PCR扩增，以步骤(1)扩增产物为模板，采用权利要求3或4所述的巢式PCR引物进行扩增。

9.根据权利要求8所述的巢式PCR扩增方法，其特征在于，第一轮RT-PCR扩增的条件为：48-52℃反转录25-35min，93-95℃预变性1.5-3min；93-95℃变性25-35s，54-56℃退火25-35s，71-73℃延伸25-30s，30-40个循环；

第二轮巢式PCR扩增的条件为：93-95℃预变性4.5-6min；93-95℃变性25-35s，54-56℃退火25-35s，71-73℃延伸25-30s，30-40个循环。

10.一种检测牡蛎中的GII型诺如病毒的方法，其特征在于，将权利要求8或9所述的巢式PCR扩增方法获得的产物进行电泳，有300-400bp条带的为阳性结果；或者将巢式PCR扩增方法获得的产物进行测序，或者将巢式PCR扩增方法获得的产物电泳后取目标条带进行测序。