[发明专利]一种环境基质中微生物宏蛋白质组样品的制备方法

权利要求书

1.一种环境基质中微生物宏蛋白质组样品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）基质样品前处理：器材预钝化处理步骤，将制备蛋白质组样品所用的器材置于预钝化处理水溶液中，浸泡6 -12小时，所述预钝化处理水溶液，化学成分以物质量浓度计包括：吐温-20：0.02-0.10 mol/L，月桂基硫酸铵：0.10-0.50 mol/L，十二烷基磺酸钠：0.05-0.20mol/L，脱氧胆酸：10-30 m mol/L；将基质样品在液氮中猝灭后，在液氮环境中加入研磨助剂研磨，得到粉末状基质样品，向所述粉末状基质样品中加入裂解液和提取液，并经过离心后，得到下层为有机相、上层为水相的分层混合液；（2）蛋白质提取和纯化：分别吸出所述步骤（1）中所述有机相和所述水相，并在所述有机相和所述水相中分别加入蛋白沉淀剂，所述蛋白沉淀剂用以将所述有机相和所述水相中的蛋白质沉淀，沉淀后的有机相和水相经过离心后，分离出沉淀A和沉淀B；混合沉淀A和沉淀B得到沉淀C；在向所述有机相和所述水相中分别加入所述蛋白沉淀剂前，还包括有机相纯化过程，向所述有机相中加入等体积质谱级超纯水，经过慢速涡旋振荡和离心后，得到纯化后的有机相；（3）蛋白水解：向所述步骤（2）中的所述沉淀C中加入蛋白溶解液进行蛋白溶解，经离心后，弃去沉淀，保留上清液，所述上清液中加入蛋白酶解液，得到酶解后的肽段样品；（4）肽段样品纯化：所述步骤（3）中酶解后的肽段样品经过纯化和冻干后，得到蛋白样品。

2.根据权利要求1所述的一种环境基质中微生物宏蛋白质组样品的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中的所述蛋白沉淀剂为醋酸铵甲醇溶液。

3.根据权利要求1所述的一种环境基质中微生物宏蛋白质组样品的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，其中所述研磨助剂的加入质量为所述基质样品质量的10%-30%，所述研磨助剂为聚乙烯基聚吡咯烷酮粉末。

4.根据权利要求1所述的一种环境基质中微生物宏蛋白质组样品的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述裂解液为pH=6.5-8.5的50-200 m mol/L Tris和0.05-0.20mol/L SDS溶液；所述提取液为pH=7.0-9.0的Tris饱和苯酚。

5.根据权利要求1所述的一种环境基质中微生物宏蛋白质组样品的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，所述蛋白溶解液的各组分浓度为：三乙基碳酸氢铵为0.1-0.5 mol/L，二硫苏糖醇为8-12 mol/L和尿素为5-8 mol/L。

6.根据权利要求1所述的一种环境基质中微生物宏蛋白质组样品的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，所述蛋白酶解液包括蛋白酶解辅助液和蛋白酶解作用液。

7.根据权利要求6所述的一种环境基质中微生物宏蛋白质组样品的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶解辅助液为蛋白酶水解促进剂DCA。

8.根据权利要求6所述的一种环境基质中微生物宏蛋白质组样品的制备方法，其特征在于，蛋白酶解作用液包括二硫苏糖醇、碘乙酰胺、碳酸氢铵和胰蛋白酶，向所述步骤（3）上清液中加入蛋白酶解作用液的次序是：二硫苏糖醇、碘乙酰胺、碳酸氢铵、胰蛋白酶，或者所述碳酸氢铵和所述胰蛋白酶同时加入。