[发明专利]一种新型p53蛋白激酶的非同位素筛选方法及其应用有效
申请号: | 202110717798.1 | 申请日: | 2021-06-28 |
公开(公告)号: | CN113430248B | 公开(公告)日: | 2022-11-11 |
发明(设计)人: | 宋伦;黄欣;吴霖;张冲冲;邢陈;刘琨 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 |
主分类号: | C12Q1/48 | 分类号: | C12Q1/48;C12P21/02 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 魏少伟 |
地址: | 100850*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 新型 p53 蛋白激酶 同位素 筛选 方法 及其 应用 | ||
1.一种鉴定eIF2ɑ蛋白激酶的方法,包括:将PERK在激酶反应液中与eIF2ɑ进行反应;所述激酶反应液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为HEPES缓冲液,所述溶质及其在所述激酶反应液中的浓度为MgCl2 10mM、乙二醇-双-(2-氨基乙醚)四乙酸2.5mM以及ATP 200µM;
所述HEPES缓冲液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质及在所述HEPES缓冲液中的浓度为50mM HEPES以及调节pH至8的NaOH。
2.一种鉴定eIF2ɑ蛋白激酶的方法,包括将PERK在激酶反应液中与eIF2ɑ进行反应;所述激酶反应液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为HEPES缓冲液,所述溶质及其在所述激酶反应液中的浓度为MgCl2 10mM、2.5mM 乙二胺四乙酸、1mM DTT以及ATP 200µM;
所述HEPES缓冲液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质及在所述HEPES缓冲液中的浓度为50mM HEPES以及调节pH至8的NaOH。
3.一种鉴定p53蛋白激酶的方法,包括:将ATM或PERK在激酶反应液中与p53进行反应;所述激酶反应液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为HEPES缓冲液,所述溶质及其在所述激酶反应液中的浓度为MgCl2 10mM、乙二醇-双-(2-氨基乙醚)四乙酸2.5mM以及ATP 200µM;
所述HEPES缓冲液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质及在所述HEPES缓冲液中的浓度为50mM HEPES以及调节pH至8的NaOH。
4.根据权利要求1-3中任一项权利要求所述的方法,其特征在于:所述反应在30℃下进行。
5.一种制备磷酸化蛋白的方法,包括:将作为底物的蛋白质与所述底物的蛋白激酶在权利要求1或2中所述激酶反应液中进行反应,得到磷酸化蛋白;
所述底物为eIF2ɑ,所述蛋白激酶为PERK。
6.一种制备磷酸化蛋白的方法,包括:将作为底物的蛋白质与所述底物的蛋白激酶在权利要求3中所述激酶反应液中进行反应,得到磷酸化蛋白;
所述底物为p53,所述蛋白激酶为ATM或PERK。
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