[发明专利]一种用于蛙病毒检测的引物及其应用有效
| 申请号： | 202110715872.6 | 申请日： | 2021-06-24 |
| 公开（公告）号： | CN113293235B | 公开（公告）日： | 2023-08-15 |
| 发明（设计）人： | 李亚男;林蠡;刘春;秦真东;林华剑 | 申请（专利权）人： | 仲恺农业工程学院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京深川专利代理事务所(普通合伙) 16058 | 代理人： | 谢雪梅 |
| 地址： | 510000 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 病毒 检测 引物 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种非疾病诊断目的的蛙病毒检测方法，其特征在于，步骤如下：
(1)待测样品DNA的提取；
(2)PCR扩增：利用以下引物进行扩增；
FV3-1-5’：CCTCCATCCCAGTCAGCA；
FV3-1-3’：CAGCAAACGGACACTTCAT；
所述引物的PCR扩增体系为20μL，在PCR反应管内分别加入2×Taq PCR Master Mix10μL，模板用量为0.3μL，FV3-1上下游引物用量各为1.0μL，用无菌ddH2O补充至20μL；同时分别用阳性对照液和阴性对照液作为模板，设置阳性和阴性对照组，混合均匀后离心进行PCR反应；
所述PCR扩增的反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，50℃退火35s，72℃延伸40s，35个循环；72℃终延伸10 min；
(3)PCR扩增产物的检测：PCR反应结束后，用1％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物的大小；
(4)结果与判定：查看PCR产物是否扩出蛙病毒346bp的MCP基因保守区的片段。
2.根据权利要求1所述的非疾病诊断目的的蛙病毒检测方法，其特征在于，所述阳性对照液为携带有扩增产物的质粒溶液。
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