[发明专利]一种红霉素菌渣中红霉素A的液质联用检测方法

说明书

本发明涉及微生物发酵培养基残渣的检测技术领域，具体涉及一种红霉素菌渣中残留红霉素A的液质联用检测方法。本发明的检测方法包括如下步骤：(1)使用提取剂溶解菌渣中的残留成分，得到供试品溶液；所述提取剂为有机溶剂和水的混合溶剂；(2)将红霉素A标准品制成标准品溶液；(3)采用超高效液相色谱‑串联质谱检测供试品溶液和标准品溶液，得到供试品溶液和标准品溶液的谱图，计算菌渣中红霉素A的含量。本发明的检测方法能快速有效检测红霉素菌渣中红霉素A残留量，在红霉素菌渣的无害化处理和资源化利用中具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及微生物发酵培养基残渣的检测技术领域，具体涉及一种红霉素菌渣中残留红霉素A的液质联用检测方法。

背景技术

红霉素是由红霉素链霉菌产生的一种十四元大环内酯类抗生素，红霉素A为主要活性成分，对革兰阳性菌具有强大抗菌作用。生产红霉素剩余的培养基残余物(以下简称“菌渣”)含有丰富的营养物质，其中蛋白质和多糖含量较高，故将其处理后转化为肥料、饲料是非常经济的选择。

但是，菌渣中还含有大量菌丝体，如果处置不当，会引起二次发酵，产生红霉素A等抗生素，造成异味，污染水体，甚至还有使微生物产生耐药性基因的潜在风险。在2008年修订的《国家危险废物名录》中，抗生素菌渣被列为一种危险废弃物，因此，对抗生素菌渣进行资源化利用前，必须要对其进行无害化处理，并对其中的红霉素A残留进行检测。

中国发明专利“CN107907616A一种菌渣中红霉素残留的检测方法”中提供了一种利用高效液相色谱法检测菌渣中红霉素残留的方法。该方法前处理步骤较为繁杂，需要反复有机试剂提取，提取液需要进一步去脂、萃取和氮吹等，而且，上机样品采用紫外检测器进行检测，灵敏度相对较低，无法满足人们更高的需求。另有食品和农业领域采用液相色谱-串联质谱检测红霉素A含量的相关报道，但是，前处理方法均涉及固相萃取、旋转蒸发和氮吹等过程，这样大大提高了样品前处理成本。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明提供一种红霉素菌渣中残留红霉素A的液质联用检测方法，目的在于：建立一种准确度高、灵敏度高、专属性强、重现性好的方法，快速有效检测红霉素菌渣中红霉素A残留量。

一种红霉素菌渣中红霉素A的液质联用检测方法，其中，红霉素A的检出限为25.0μg/kg；

本发明还提供一种红霉素菌渣中残留红霉素A的液质联用检测方法，包括如下步骤：

(1)使用提取剂溶解红霉素菌渣中的残留成分，得到供试品溶液；所述提取剂为有机溶剂和水的混合溶剂，所述有机溶剂的体积比为50～100％；

(2)将红霉素A标准品制成标准品溶液；

(3)采用高效液相色谱-质谱联用检测供试品溶液和标准品溶液，得到供试品溶液和标准品溶液的谱图，计算菌渣中红霉素A的含量；

其中，色谱条件为：色谱柱为C18柱；流动相包括弱极性相和强极性相，所述弱极性相选自甲醇或乙腈，强极性相选自甲酸水溶液、乙酸水溶液、甲酸-甲酸铵溶液或乙酸-乙酸铵溶液，其中酸含量为0.1％～0.5％(v/v)，铵盐浓度为0.01M～0.20M。

优选的，步骤(1)中，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈或丙酮。

优选的，步骤(1)中，所述有机溶剂选自甲醇。

优选的，步骤(1)中，所述有机溶剂的体积比为100％。

优选的，步骤(1)中，所述红霉素菌渣含水率为2％～95％；和/或，所述菌渣与提取剂的用量比例为0.5～2.0g:10～50mL；和/或，所述供试品溶液通过如下方式得到：将菌渣用提取剂定容后，涡旋振荡2～10min，然后4000～8000rpm，离心5～10min，取上清液。