[发明专利]青杨雄株的组培培养基及其应用

权利要求书

1.一种用于青杨雄株的组培培养基，其特征在于，由用于诱导茎段外植体形成愈伤组织的愈伤组织诱导培养基、用于诱导愈伤组织生长不定芽的愈伤组织分化培养基和用于诱导不定芽生根的生根培养基组成；

所述愈伤组织诱导培养基由以下物质组成：WPM 2.7g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+TDZ0.1mg/L+NAA 0.3mg/L～0.5mg/L，或者所述愈伤组织诱导培养基由以下物质组成：WPM2.7g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+6-BA 1.0mg/L+2,4-D 0.5mg/L～1.0mg/L，或者所述愈伤组织诱导培养基由以下物质组成：WPM 2.7g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+ZT 2.0mg/L+NAA1.0mg/L；所述愈伤组织分化培养基由以下物质组成：MS 4.74g/L+蔗糖30g/L、琼脂7g/L+6-BA 1.0mg/L～1.5mg/L+NAA 0.1mg/L～1.0mg/L；

所述生根培养基由以下物质组成：WPM 2.6g/L+蔗糖20g/L+琼脂7g/L+IBA 0.1mg/L～0.2mg/L+NAA 0.02mg/L～0.2mg/L。

2.根据权利要求1所述的用于青杨雄株的组培培养基，其特征在于，所述愈伤组织诱导培养基由以下物质组成：WPM 2.7g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+TDZ 0.1mg/L+NAA 0.3mg/L；且/或，

所述愈伤组织分化培养基由以下物质组成：MS 4.74g/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+6-BA1.0mg/L+NAA 0.1mg/L；且/或，

所述生根培养基由以下物质组成：WPM 2.6g/L+蔗糖20g/L+琼脂7g/L+IBA 0.2mg/L+NAA 0.02mg/L。

3.根据权利要求1或2所述的用于青杨雄株的组培培养基，其特征在于，所述愈伤组织诱导培养基、所述愈伤组织分化培养基和所述生根培养基的pH值均为5.8。

4.权利要求1至3任一项所述的用于青杨雄株的组培培养基在建立青杨雄株再生体系中的应用。

5.一种青杨雄株再生体系建立的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）外植体的选择和灭菌：选取青杨雄株顶端茎段作为外植体，用自来水冲洗后在无菌环境下置于无菌瓶中，乙醇消毒、无菌水清洗后，用NaClO消毒、无菌水清洗，再用无菌滤纸吸干外植体材料表面的水分后，用无菌解剖刀将茎段外植体切割成小段，并在段状外植体的背面切割数个伤口；

2）愈伤组织诱导：将步骤1）得到的段状外植体接种到固态的愈伤组织诱导培养基中，在黑暗环境中培养20天～30天，诱导出愈伤组织；所述愈伤组织诱导培养基由以下物质组成：WPM 2.7g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+TDZ 0.1mg/L+NAA 0.3mg/L～0.5mg/L，或者所述愈伤组织诱导培养基由以下物质组成：WPM 2.7g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+6-BA 1.0mg/L+2,4-D 0.5mg/L～1.0mg/L，或者所述愈伤组织诱导培养基由以下物质组成：WPM 2.7g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+ZT 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L；小段的茎段接种到所述愈伤组织诱导培养基上时，形态学上端向上正插入所述愈伤组织诱导培养基中，并露一半在外；

3）分化培养：将步骤2）形成的愈伤组织接种到愈伤组织分化培养基上，培养25天～35天，培养出青杨雄株不定芽；其中，所述愈伤组织分化培养基由以下物质组成：MS 4.74g/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+6-BA 1.0mg/L～1.5mg/L+NAA 0.1mg/L～1.0mg/L；

4）生根培养：将步骤3）形成的青杨雄株不定芽取出，切下2cm～3cm的芽转接入生根培养基中，培养25天～35天，得到生根的青杨雄株无菌组培苗；其中，所述生根培养基由以下物质组成：WPM 2.6g/L+蔗糖20g/L+琼脂7g/L+IBA 0.1mg/L～0.2mg/L+NAA 0.02mg/L～0.2mg/L；

5）组培苗炼苗移栽：将苗高在4.5cm～5.5cm青杨雄株组培苗移栽到无菌土中，上覆保鲜膜保湿，7天后开始逐渐部分掀开保鲜膜，直到幼苗叶片完全暴露在空气中不会脱水，即完成青杨雄株再生体系的建立。