[发明专利]一种用于迟缓爱德华氏菌检测的基因芯片探针组

说明书

本发明公开了一种用于迟缓爱德华氏菌检测的基因芯片探针组，属于食品安全和食源性致病微生物检测技术领域。所述基因芯片探针组包括捕获探针ET‑CP、检测探针ET‑DP、滚环探针ET‑RCP，其中所述检测探针ET‑DP是由ET‑DPA，ET‑DPB和ET‑DPC按照5’‑3’方向依次连接而成。本发明所述基因芯片探针组选取了迟缓爱德华氏菌毒力相关的特异性靶蛋白基因的DNA片段，并以所述基因芯片探针组开发了基因芯片滚环探针检测迟缓爱德华氏菌，该方法灵敏度高，可实现快速、准确、便捷的检测，对于实验室研究和食品安全、水产养殖、海产品质量安全检测以及海洋环境监测等生产实践都具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及食品安全和食源性致病微生物检测技术领域，特别是涉及一种用于迟缓爱德华氏菌检测的基因芯片探针组。

背景技术

农产品和食品安全一直是全社会广泛关注的问题，而这其中，食源性致病微生物往往是导致食品安全问题的重要因素。用于食源性致病微生物检测的传统方法，一般存在着操作方法步骤多、检测时间长、结果灵敏度低等问题。随着生物技术的飞速发展，一些基于酶联免疫、生物传感器、荧光检测、PCR技术的新的食源性致病微生物检测技术也应运而生，检测方法呈现出多样性。在食品安全领域，开发食源性致病微生物快速、高效、准确的检测方法，是满足社会不断提高的食品安全要求的需要，是满足不同领域的检测研究的需要，这也进一步推动了现代化检测技术的革新。

基因芯片技术作为新型检测手段，结合了基因探针、荧光检测技术，在理论上可以在一次实验中检出所有潜在的致病原，也可以用同一张芯片检测某一致病原的多种遗传学指标，具有检测速度快、准确度高、微量化等特点，受到食品安全研究者的关注，是食品安全检测的有力工具。

迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)是革兰氏阴性细菌，在分类学上属于肠杆菌科(Entero bacteriaceae)爱德华氏菌属(Edwardsiella)。它是一种常见的水产病原菌，也是一类危害性较强的食源性致病微生物。在形态上，该细菌呈现短杆状，无荚膜，以周生鞭毛作为运动器官。爱德华氏菌感染的宿主类群比较广泛，从鱼类、爬行类、鸟类、哺乳动物和人类，危害性较大，其防治研究也有很多。在水产养殖领域，由爱德华氏菌引起的鱼类疾病，统称为鱼类的爱德华氏菌病(Edwardsiellasis)，该病流行面积大、发病率和死亡率高、能引起多种鱼类感染发病，是一种重要的病害。迟缓爱德华氏菌毒力因子的研究为揭示其致病过程提供了基础资料，主要涉及的毒力因子有铁载体、过氧化氢酶、溶血素等方面。研究发现，迟缓爱德华氏菌Ⅲ型分泌系统与其致病性密切相关，其分泌的不同致病性蛋白可以作用于宿主细胞和相关分子。基于现有技术检测手段的发展，以及迟缓爱德华氏菌与致病性的关系，提供一种新的检测迟缓爱德华氏菌的方法，对于解决传统检测方法所存在的弊端意义重大。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于迟缓爱德华氏菌检测的基因芯片探针组，以解决上述现有技术存在的问题，通过选取迟缓爱德华氏菌Ⅲ型分泌系统相关基因作为靶序列，设计特异性检测探针，为准确检查致病性迟缓爱德华氏菌提供新的技术方法。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种用于迟缓爱德华氏菌检测的基因芯片探针组，包括捕获探针ET-CP、检测探针ET-DP、滚环探针ET-RCP，其中所述检测探针ET-DP是由ET-DPA，ET-DPB和ET-DPC按照5’-3’方向依次连接而成。

优选的是，所述捕获探针ET-CP和所述检测探针ET-DP序列包括如下任意一组所示的序列：

(1)ET-CP1(SEQ ID NO：1)：5’-NH2-TTTTTTTGCGTCGATCTGATTAGCCA-3’；