[发明专利]一种表达埃博拉GP蛋白的重组病毒及其制备方法和应用

说明书

本发明属于生物工程技术领域。具体涉及一种表达埃博拉GP蛋白的重组病毒、该重组病毒的构建、制备方法及其在抗埃博拉病毒中的应用。所述的重组病毒为可以表达埃博拉GP蛋白的重组水泡型口炎病毒rVSVΔG‑Makona‑GP；该病毒含有Makona GP蛋白基因的重组全基因组克隆质粒pCI‑RzVSVΔG‑Makona‑GP。本发明的优点：(1)重组病毒易于增殖、致病性极低、无基因漂移风险、安全性更高。(2)重组病毒的构建方法简单，易行，易于大规模生产。(3)重组病毒对EBOV具有交叉保护能力。(4)疫苗一次免疫食蟹猴就可以快速激发体液免疫反应，产生特异性EBOV中和抗体。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域。具体涉及一种表达埃博拉GP蛋白的重组病毒、该重组病毒的构建、制备方法及其在抗埃博拉病毒中的应用。

背景技术

埃博拉病毒病(Ebola virus disease，EVD)是由埃博拉病毒(Ebola virus，EBOV)感染引起的急性，发热并伴有严重出血症状的烈性人兽共患病。EBOV是致死率最高的病原之一，感染后致死率最高可达90％。自1976年EHF在扎伊尔东北部和苏丹南部暴发以来，至今发生过多次疫情。至今已发现并分离多种抗原型的EBOV，分别为扎伊尔型(Zaire Ebolavirus,ZEBOV)，苏丹型(Sudan ebola virus,SEBOV)，莱斯顿型(Reston ebola virus,REBOV)，本迪布焦型(Bundigbugyo ebola virus,BEBOV)和塔伊森林型(Forest ebolavirus，TAFV)，而其中ZEBOV爆发次数最多、致死率最高。EVD病程短，感染1～4天就会死亡。

EBOV属于丝状病毒科(Filoviridae)，EBOV属，具有囊膜，基因组为不分节段的单股负链RNA病毒。EBOV的基因组编码7种结构蛋白，从3’端到5’端依次为核蛋白(NP)，VP35，VP40，糖蛋白(GP)，VP30，VP24以及RNA依赖的RNA聚合酶蛋白(L)，此外，EBOV还编码两种非结构蛋白：sGP和ssGP。EBOV的GP蛋白是病毒粒子表面唯一的跨膜蛋白，通过与宿主细胞表面的受体结合介导病毒与宿主细胞融合，使病毒吸附并进入细胞。成熟的GP蛋白以三聚体的形式呈现在病毒粒子表面，是诱导产生中和抗体的最关键蛋白，是保护动物免受病毒感染的最关键的免疫原性蛋白。

2014年在西非出现的疫情是继1976年首次发现EBOV以来发生的最严重且最复杂的EBOV疫情。此次疫情爆发流行的EBOV属于ZEBOV，但其为一个新变种，其GP蛋白与1976年的ZEBOV株相比，氨基酸同源性为97.6％。2014年西非流行株的抗原性与之前相比发生了一定的变化。研制能够快速激发免疫应答的疫苗对于紧急免疫、挽救病人生命，非常重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种表达埃博拉GP蛋白的重组病毒和该重组病毒的构建方法，方法简单，易行，易于大规模生产。本发明还提供了该重组病毒的应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种表达埃博拉GP蛋白的重组病毒，所述的重组病毒为可以表达埃博拉GP蛋白的重组水泡型口炎病毒rVSVΔG-Makona-GP；

该病毒含有Makona GP蛋白基因的重组全基因组克隆质粒pCI-RzVSVΔG-Makona-GP。

进一步的，所述的Makona GP蛋白基因序列为合成基因序列，其以EBOV西非流行株Makona株(GeneBank:KP178538.1)的GP的基因序列按照哺乳动物密码子偏噬性对GP蛋白进行人工密码子优化并合成，并在在起始密码ATG前分别引入VSV基因起始、终止及Kozak序列；其3’→5’的顺序为：

TATGAAAAAAACTAACAGATATCACGACGCGTACAACC。

本发明还提供一种表达埃博拉GP蛋白的重组病毒的制备方法。