[发明专利]一种组织切片抗原修复液及其使用方法

说明书

本发明提出了一种组织切片抗原修复液及其使用方法，该抗原修复液为Tris/EDTA修复缓冲液，1L抗原修复液中包含Base Tris 1.9‑2.5g和EDTA 0.7‑1.1g，加缓冲液稀释至1L，本申请通过优化Tris/EDTA修复液中EDTA和Tris‑base的比例配方，并针对性调整修复应用过程中的加热条件，有效提高了免疫组化实验中难以修复的抗原暴露度，使难以暴露的抗原得到很好的修复，在后续的实验中能很好的和一抗抗体相结合，同时又不至于修复过度产生不必要的非特异性染色，综合修复效率显著提高，高效实用。

技术领域

本发明涉及免疫组化技术领域，具体的为一种组织切片抗原修复液及其使用方法。

背景技术

免疫组织化学技术是近年来病理诊断迅速发展的检测技术，作为一种重要的病理辅助诊断方法，在临床的应用中日益受到重视。随着全自动免疫组化染色仪的应用推广，对于染色质量的要求也日益提高。其中，抗原修复在整个免疫组化染色过程中有着极其重要的作用，修复条件的好坏直接决定着最终染色结果的质量。

目前同类型产品有多种不同类型的修复液，常用的有枸橼酸钠缓冲液和Tris/EDTA 缓冲液。枸橼酸钠缓冲液PH值在6左右，简称AR6，Tris/EDTA 缓冲液的PH值在9左右，简称AR9，这两类修复液广泛应用于免疫组化和荧光免疫组化实验的抗原修复过程。

枸橼酸钠缓冲液主要成分是：10 mM 柠檬酸钠，0.05% 吐温20。Tris/EDTA缓冲液的主要成分：1L缓冲液中含EDTA 0.292 g，Tris-base 6.05 g。

抗原修复液的作用原理：在固定过程中甲醛和样本中的蛋白结合产生了交联，屏蔽了抗原位点。利用化学试剂（修复液）和热的作用将这些交联打断，使抗原表位重新暴露出来，以便于后续实验样本中的抗原与抗体结合。

常用的枸橼酸钠和Tris/EDTA对大部分的蛋白修复效果都可以，但是存在少数较难暴露的蛋白抗原，如核蛋白和跨膜蛋白的中间段，比较难以暴露，对于这类难暴露的蛋白实验结果容易出现假阴性的结果，导致实验结果判断错误。此外，对于部分蛋白还会出现修复过渡导致的非特异性染色，极大影响修复质量和后续试验操作。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种组织切片抗原修复液及其使用方法，通过优化Tris/EDTA修复液中EDTA 和Tris-base的比例配方，并针对性调整修复应用过程中的加热条件，有效提高了免疫组化实验中难以修复的抗原暴露度，使难以暴露的抗原得到很好的修复，在后续的实验中能很好的和一抗抗体相结合，同时又不至于修复过度产生不必要的非特异性染色，综合修复效率显著提高，高效实用。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种组织切片抗原修复液，该抗原修复液为Tris/EDTA修复缓冲液，1L抗原修复液中包含Base Tris 1.9-2.5g和EDTA 0.7-1.1g，加缓冲液稀释至1L。

作为本发明进一步优选，缓冲液为1xTBST溶液，由10xTBST溶液稀释10倍后制备。

作为本发明进一步优选，10xTBST配制方法为，先称量NaCL 87.6g，倒入烧杯中，加入双蒸水800ml，Tris-HCL 100ml，加5ml吐温20，溶解后转入1000ml容量瓶中定容至1L。

作为本发明进一步优选，组织切片抗原修复液使用方法，包括以下步骤：

1）按配方配置Tris/EDTA修复缓冲液，备用；将组织切片样本拷片脱蜡，备用；

2）将步骤1）中修复缓冲液导入免疫组化染色缸中，置入微波炉中高火加热至沸腾；

3）将步骤1）中脱蜡后的样本玻片置入沸腾的修复缓冲液中继续中高火加热5分钟；

4）转中小火继续加热15分钟，取出，待自然冷却后即可，实际操作中，则进入下步操作，DAPI染色或封闭等。