[发明专利]一种哌尼生素前体、表达盒及其制备方法

权利要求书

1.一种哌尼生素Penisin表达盒，用于编码上述哌尼生素Penisin前体，从5’端到3’端penA1蛋白编码基因penA1、penB蛋白编码基因penB、penT蛋白编码基因penT、penC蛋白编码基因penC、penD蛋白编码基因penD依次串联排列。

2.如权利要求1所述的哌尼生素Penisin表达盒，采用三段克隆片段，片段1为penA1编码基因，片段2为penB蛋白编码基因和penT蛋白编码基因，片段3为penC蛋白编码基因和penD蛋白编码基因。

3.如权利要求2所述的哌尼生素Penisin表达盒，采用in-fusion克隆扩增技术，采用引物P1和P2克隆片段1，P3和P4克隆片段2，P5和P6克隆片段3；还包括启动子，启动子的3’端连接penA1蛋白编码基因penA1，所述启动子为P43启动子。

4.如权利要求1、2或3所述哌尼生素Penisin表达盒，所述哌尼生素前体氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

5.如权利要求1、2或3所述的哌尼生素Penisin表达盒，序列为SEQ ID NO.1。

6.一种表达载体或基因工程菌，包括权利要求1-5任一表达盒，所述表达载体为pP43NMK表达载体；所述基因工程菌为枯草芽孢杆菌。

7.一种哌尼生素Penisin的制备方法，包括以下步骤：

（1）用引物将基因penA1、penBT、penCD克隆形成三个片段；

（2）通过 In-fusion 克隆技术将 penA1、penBT、penCD基因片段连接于表达载体，与载体上的启动子和信号肽基因连接后形成penA1BTCD表达盒；

（3）将带有penA1BTCD表达盒的pP43NMK重组载体转化入基因工程菌枯草芽孢杆菌中筛选阳性重组子，在培养基中发酵培养，提取发酵液中分泌蛋白。

8.如权利要求7所述哌尼生素的制备方法，哌尼生素表达量为0.5～1 g/L。

9.如权利要求7所述哌尼生素的制备方法，所述基因工程菌的培养基为：豆粕粉1%，酵母粉1%，蛋白胨1%，葡萄糖1%，氯化钠0.5%。