[发明专利]一组活性增强代谢较慢的菲牛蛭基因重组水蛭素及其制备方法

权利要求书

1.基因重组菲牛蛭水蛭素(HM2)氨基酸突变蛋白HM2-E60D-I62D，其特征在于以HM2的氨基酸序列为模板，将其第60位谷氨酸(E)和第62位异亮氨酸(I)同时突变为天冬氨酸(D)。

2.将HM2第61位天冬氨酸(D)突变为丙氨酸(A)。

3.将HM2第60位谷氨酸(E)和第62位异亮氨酸(I)同时突变为天冬氨酸(D)。

4.权利要求1所述的HM2氨基酸序列。

5.权利要求1所述的HM2的经过优化的核苷酸序列。

6.权利要求1所述的HM2-D61A氨基酸序列。

7.权利要求1所述的HM2-D61A经过优化的核苷酸序列。

8.权利要求1所述的HM2-E60D-I62D氨基酸序列。

9.权利要求1所述的HM2-E60D-I62D经过优化的核苷酸序列。

10.基于权利要求1中的重组HM2-E60D-I62D蛋白质制备的突变蛋白，其特征在于，以HM2-E60D-I62D氨基酸序列为模板，将其第26位氨基酸、第30位氨基酸、第43为氨基酸、第47位氨基酸、第48位氨基酸突变、或将第26位、第30位、第47位和第48位氨基酸同时突变，得到HM2-E60D-I62D突变蛋白：HM2-E60D-I62D-K26H、HM2-E60D-I62D-L30I、HM2-E60D-I62D-K47H、HM2-E60D-I62D-S48T、HM2-E60D-I62D-K26H-L30I-K47H-S48T和HM2-E60D-I62D-T43S。

11.权利要求10所述的各种突变蛋白经过优化的的核苷酸序列。

12.权利要求10所述的各种突变蛋白的氨基酸序列。

13.权利要求1、2、10所述的基因重组蛋白的N末端连有组氨酸标签(HisTag)。

14.权利要求1、2、10所述的基因重组蛋白的体外表达方法，其特征在于利用可诱导表达质粒在大肠杆菌中表达上述重组蛋白。

15.权利要求1、2、10所述的基因重组蛋白的分离纯化方法，其特征在于用Ni柱纯化带有组氨酸标签的上述重组蛋白。