[发明专利]非受体酪氨酸激酶TNK2蛋白在防治流感病毒感染中的应用

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，是一种抗流感病毒感染的新靶点及应用。本发明以人肺上皮细胞（A549）作为靶细胞，采用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制或阻碍靶细胞宿主蛋白的表达，来挖掘可有效抑制流感病毒感染宿主的宿主因子。本发明提供了非受体酪氨酸激酶TNK2在防止流感病毒感染中的应用，本发明通过实验发现非受体酪氨酸激酶TNK2蛋白在流感病毒感染A549中发挥着重要作用。本发明提供了非受体酪氨酸激酶TNK2蛋白在制备预防或治疗流感病毒感染药物中的应用。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，是一种抗流感病毒感染的新靶点及应用。

背景技术

流感病毒引起严重的呼吸道疾病，危害公共环境和生命安全，90年代至今已经造成四次全球性流感大流行，危害性极大。尽管成功的疫苗研发，已经可以有效预防流感病毒感染，但是由于流感病毒具有高度变异性，导致疫苗效果达不到理想状态。根据流感病毒感染宿主的特性，我们发现宿主因子广泛的参与病毒复制周期中，并且宿主因子具有明显的广谱特性，因此，利用宿主因子作为药物靶点在抗流感病毒感染中具有重要的作用。非受体酪氨酸激酶TNK2蛋白属于非受体酪氨酸激酶家族成员之一，其含有多个结构域，包括一个SAM区、一个酪氨酸激酶催化区、一个Cdc42/Rac结合区以及一个泛素结合区等，并且其能够定位于细胞内多个组分，导致赋予其功能多样性的特性，例如调控细胞生长周期、调节EGFR内吞、泛素化以及细胞内信号转导等；此外，研究发现，TNK2也参与多种肿瘤的发生发展过程中，TNK2可以通过EGFR持续表达促进乳腺癌细胞的迁移，通过调控组蛋白修饰影响前列腺癌等。因此，TNK2在癌症早期筛查、靶向治疗和预后评价中具有重要的作用。

CRISPR/Cas9 技术是基于广泛存在于细菌及古细菌中的一种获得性免疫防疫机制，后期经由人工改造开发而建立，通过导向 RNA序列在靶标基因特定位点进行切割引起DNA双链断裂，进而诱发细胞内的非同源末端修复，造成碱基缺失、插入，进而实现基因功能敲除的目的。该技术使用方便，操作简单，成本低，为基因组定向改造、调控与应用等带来突破性革命。目前，CRISPR/Cas9 技术已广泛应用于特定基因敲除功能研究，以及敲除基因的动物模型构建等领域，对深入挖掘基因功能、精准治疗方面具有广阔的前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗流感病毒感染的新靶点。

本发明的另一目的在于提供非受体酪氨酸激酶TNK2蛋白的新用途，特别是在抗流感病毒感染中的应用。

本发明的第三目的在于提供抑制或阻碍非受体酪氨酸激酶TNK2蛋白分子表达的gRNA。

本发明的主要技术方案是：

本发明，以人肺上皮细胞（A549）作为靶细胞，采用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制或阻碍宿主蛋白的表达，来挖掘可有效抑制流感病毒感染的宿主因子，从而保护机体免受侵害的功能。本实验发现非受体酪氨酸激酶TNK2蛋白在流感病毒感染人肺上皮细胞（A549）中发挥着重要作用，利用设计的人和猪的TNK2 gRNA抑制或阻碍TNK2蛋白表达，并通过分子生物学和免疫实验，来观察对流感病毒感染的影响。结果发现抑制或阻碍TNK2蛋白表达能显著抑制流感病毒感染。

本发明的第一方面，提供了非受体酪氨酸激酶TNK2作为一种抗流感病毒感染的新靶点。

本发明的第二方面，提供了非受体酪氨酸激酶TNK2在制备预防或治疗流感病毒感染药物中的应用。

进一步地，本发明还提供非受体酪氨酸激酶TNK2在制备预防或治疗流感药物中的应用。

本发明所述的非受体酪氨酸激酶TNK2在制备预防或治疗流感病毒感染药物药物中的应用，该药物具体是指能够抑制或阻碍TNK2表达的试剂。

所述的抑制或阻碍TNK2表达的试剂可以是gRNA 或者是包含gRNA的重组载体等。