[发明专利]一种牛Ⅰ型胶原蛋白的纯化方法

权利要求书

1.一种牛Ⅰ型胶原蛋白纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）在10-37℃下将粗提取的牛Ⅰ型胶原蛋白溶解，与非胶原蛋白酶的蛋白水解酶混合搅拌，酶解12-24h，使用流变仪监测粘度变化，酶解完成后离心，取上清液；其中，反应液粘度达到0.01-1Pa·S表示酶解完成；所述粗提取的牛Ⅰ型胶原蛋白为经酸提取法提取得到的牛Ⅰ型胶原蛋白；所述非胶原蛋白酶的蛋白水解酶与牛Ⅰ型胶原蛋白的质量比为0.1-10:1；所述非胶原蛋白酶的蛋白水解酶选自胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶中的一种或多种；

（2）将步骤（1）的上清液pH调节至3.5-5，依次滴加终浓度为15-25%v/v、30-45%v/v、50-70%v/v和75-95%v/v的醇溶液，依次析出4个胶原蛋白沉淀，合并后得到去端肽牛Ⅰ型胶原蛋白沉淀；其中，醇溶液的滴加速度为50-100ml/h；

（3）将步骤（2）的去端肽牛Ⅰ型胶原蛋白沉淀在pH2-4的酸溶液中复溶，调节至等电点，离心取沉淀，再次在pH2-4的酸溶液中复溶，在pH3-5的酸溶液中透析，过滤除菌，取滤液，得到纯化后的牛Ⅰ型胶原蛋白，其中，透析袋的截留分子量为8-100kDa。

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：在步骤（2）中，依次滴加终浓度为20-25%v/v、40-45%v/v、60-65%v/v和80-85%v/v的醇溶液。

3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：在步骤（2）中，每个胶原蛋白级分析出后进行离心，得到所述去端肽牛Ⅰ型胶原蛋白沉淀，收集上清液旋蒸浓缩并进行下一个级分的醇沉处理。

4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：在步骤（2）中，所述醇溶液选自甲醇、乙醇、丙酮和异丙醇中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：在步骤（2）中，在1-10℃下滴加醇溶液。

6.一种权利要求1-5任一项所述的纯化方法在制备食品、化妆品或生物医学材料中的应用。