[发明专利]一种表达II型单纯疱疹病毒蛋白的重组流感病毒株及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种表达II型单纯疱疹病毒蛋白的重组流感病毒株，其特征在于，

所述重组流感病毒株为表达II型单纯疱疹病毒蛋白的流感病毒载体通过反向遗传系统在细胞中拯救出的表达II型单纯疱疹病毒蛋白的重组流感病毒；

编码所述II型单纯疱疹病毒蛋白的基因位于改造过的甲型流感病毒NS片段的开放阅读框内；编码所述II型单纯疱疹病毒蛋白的核心抗原表位的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述改造过的甲型流感病毒NS片段的剪接位点进行了同义突变：将525-CCAGGA-530 突变为525-CCCGGG-530；

所述II型单纯疱疹病毒蛋白的基因片段的5’端通过T2A连接子与甲型流感病毒NS1片段3端’连接；II型单纯疱疹病毒蛋白的基因片段的3’端通过P2A连接子与甲型流感病毒NEP片段5’端连接；

所述流感病毒载体为A型流感病毒A/WSN/33，所述表达II型单纯疱疹病毒蛋白的重组流感病毒株的保藏编号为CCTCC NO: V202148。

2.权利要求1所述的表达II型单纯疱疹病毒蛋白的重组流感病毒株在制备II型单纯疱疹病毒疫苗中的应用。

3.权利要求1所述的表达II型单纯疱疹病毒蛋白的重组流感病毒株在利用鸡胚或细胞作为生物反应器生产II型单纯疱疹病毒蛋白中的应用。

4.一种II型单纯疱疹病毒蛋白的重组流感病毒疫苗，其特征在于，包括权利要求1所述的表达II型单纯疱疹病毒蛋白的重组流感病毒株。

5.一种表达II型单纯疱疹病毒蛋白的重组流感病毒株的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

将甲型流感病毒WSN中NS片段的剪接位点进行同义突变，将525-CCAGGA-530 突变为525-CCCGGG-530；

获得氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示II型单纯疱疹病毒蛋白的串联基因；

将所述串联基因通过Linker连接于甲型流感病毒NS1片段和甲型流感病毒NEP片段之间，获得5’-3’方向分别为NS1、T2Alinker、II型单纯疱疹病毒基因、P2Alinker、NEP的重组NS质粒；

将所述重组NS质粒和WSN的其他七个质粒共转染宿主细胞，获得表达II型单纯疱疹病毒蛋白的重组流感病毒株。

6.一种II型单纯疱疹病毒蛋白，其特征在于，所述II型单纯疱疹病毒蛋白为串联D蛋白中的高度保守区36aa-82aa和146aa-187aa之间用AAYlinker连接而得，编码所述II型单纯疱疹病毒蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

7.一种编码权利要求6所述II型单纯疱疹病毒蛋白的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

8.一种表达载体，其特征在于，包含有权利要求7所述的核酸分子。

9.一种生物材料，其特征在于，所述生物材料为包含权利要求8所述表达载体的细胞系或重组菌，所述细胞系包括MDCK、A549和VERO细胞系中的一种。