[发明专利]一种酿酒酵母蛋白酶缺失菌株的构建及其应用

权利要求书

1.一种重组酵母菌株，其特征在于，所述重组酵母菌株的基因组中整合有表达外源蛋白的表达盒，并且，所述重组酵母菌株的内源的蛋白酶基因被敲除；所述的蛋白酶为：Pep4、Yap3、Prb1和CYM1；

所述的Pep4的编码基因如SEQ ID NO: 9所示，所述的Yap3的编码基因如SEQ ID NO:10所示，所述的Prb1的编码基因如SEQ ID NO: 11所示，所述的CYM1的编码基因如SEQ IDNO: 12所示；

所述外源蛋白为GLP-1、GLP-2、胰高血糖素或肠激酶。

2.如权利要求1所述的重组酵母菌株，其特征在于，所述的重组酵母菌株为重组酿酒酵母菌株。

3.如权利要求1所述的重组酵母菌株，其特征在于，所述表达外源蛋白的表达盒从5’到3’依次包括：抗性标记编码序列、启动子序列、α factor、外源蛋白编码序列、终止子序列。

4.如权利要求1所述的重组酵母菌株，其特征在于，所述表达外源蛋白的表达盒的核苷酸序列如SEQ ID NO: 1所示。

5.一种生产多肽的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

(i) 培养权利要求1所述的重组酵母菌株，从而获得含所述多肽的发酵产物；和

(ii) 从所述的发酵产物中分离出所述多肽。

6.一种构建权利要求1所述的重组酵母菌株的方法，其特征在于，包括步骤：

(a) 构建含有外源蛋白表达盒的载体；

(b) 构建用于下调蛋白酶基因的载体，和

(c) 将步骤(a)和步骤(b)获得的载体分别转入酵母菌株，获得含有外源蛋白表达盒，并且内源的蛋白酶基因的表达被下调的工程菌；

(d)将步骤(c)所得工程菌进行二倍体融合，从而获得二倍体重组酵母菌株；

其中，所述的蛋白酶为：Pep4、Yap3、Prb1和CYM1。

7.一种权利要求1所述的重组酵母菌株的用途，其特征在于，所述菌株用于生产多肽，所述多肽是GLP-1、GLP-2、胰高血糖素或肠激酶。