[发明专利]一种蛋白质提取试剂及其制备方法以及蛋白质提取方法

权利要求书

1.一种蛋白质提取试剂，其特征在于，包含尿素、十二烷基硫酸钠、聚乙二醇辛基苯基醚、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、乙二胺四乙酸、二甲基亚砜。

2.如权利要求1所述的一种蛋白质提取试剂，其特征在于，所述尿素的质量体积比为40g/L；

所述十二烷基硫酸钠的质量体积比为1g/L；

所述聚乙二醇辛基苯基醚的体积百分含量为0.1％；

所述氯化钠的质量体积比为8g/L；

所述氯化钾的质量体积比为0.2g/L；

所述磷酸氢二钠的质量体积比为1.42g/L；

所述磷酸二氢钾的质量体积比为0.27g/L；

所述乙二胺四乙酸的质量体积比为8g/L；

所述二甲基亚砜的体积百分含量为1％。

3.如权利要求2所述的一种蛋白质提取试剂，其特征在于，还包含浓盐酸，采用所述浓盐酸将所述蛋白质提取试剂的pH值调至7.0-7.5。

4.一种蛋白质提取试剂的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：

步骤A1：将乙二胺四乙酸粉末溶解于800mL的去离子水中；

步骤A2：加入40g尿素溶解；

步骤A3：依次加入十二烷基硫酸钠、聚乙二醇辛基苯基醚、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、二甲基亚砜后溶解并定容至1000mL制得蛋白质提取试剂。

5.如权利要求4所述的一种蛋白质提取试剂的制备方法，其特征在于，在所述步骤A3得到的所述蛋白质提取试剂中加入浓盐酸将pH值调至7.0-7.5，随后加去离子水定容至1L，在使用0.2μm的滤膜进行过滤除菌。

6.一种蛋白质提取方法，其特征在于，包含以下步骤：

步骤B1：获取组织，并将所述组织置于磷酸缓冲盐溶液中洗涤三次，去除多余的血液或培养液；

步骤B2：以100mg的组织或细胞配1ml的蛋白质提取试剂的比例加入离心管中，并加入研磨瓷珠置于组织匀浆器中研磨；

步骤B3：研磨完成后在冰上静置5min，随后离心获得总蛋白溶解上清。

7.如权利要求6所述的一种蛋白质提取方法，其特征在于，步骤B2中需加入3-7颗的研磨瓷珠置于组织匀浆器中以温度为4℃的条件下研磨2min。

8.如权利要求7所述的一种蛋白质提取方法，其特征在于，步骤B3中所述离心的条件为12000rpm下离心5min。

9.如权利要求1-3任一项所述的一种蛋白质提取试剂在蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳、蛋白Western blot定性和/或定量以及免疫沉淀和免疫共沉淀中的应用。