[发明专利]一种茶叶中苦参碱和氧化苦参碱同时定量检测的方法

权利要求书

1.一种茶叶中苦参碱和氧化苦参碱同时定量检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：

s1、样品的提取，

定量称取茶叶样品，在样品中加入氨水后，以三氯甲烷作为提取试剂，采用超声波提取，旋蒸至近干，即得标准品；

s2、配置标准曲线溶液，

在标准品中加入甲醇定容，并采用逐级稀释的方法配置标准曲线溶液；

s3、采用高效液相色谱-串联三重四极杆质谱技术检测标准曲线溶液中苦参碱和氧化苦参碱的残留量。

2.根据权利要求1所述的茶叶中苦参碱和氧化苦参碱同时定量检测的方法，其特征在于：步骤s1中，称取茶叶样品0.50g，加入0.5mL氨水静置30min，后加入20mL三氯甲烷超声30min，至少重复2次；再加入0.5g无水硫酸钠混匀，将全部溶液旋蒸至近干。

3.根据权利要求1所述的茶叶中苦参碱和氧化苦参碱同时定量检测的方法，其特征在于：步骤s2中，

(1)分别称取定量标准品，用甲醇配置成1.0mg/mL的标准储备液，低温储存；

(2)取适量各标准储备液，用5％甲醇稀释成1.0mg/L的混合标准溶液；

(3)用样品空白基质溶液逐级稀释配制成浓度为2-100ng/mL范围内的标准曲线溶液；

(4)将每份标准曲线溶液通过粒径不大于0.22μm的滤膜过滤，上机检测。

4.根据权利要求3所述的茶叶中苦参碱和氧化苦参碱同时定量检测的方法，其特征在于：用空白基质溶液将各混合标准溶液逐级稀释配制成浓度为2、5、10、20、50、100ng/mL的标准曲线溶液。

5.根据权利要求4所述的茶叶中苦参碱和氧化苦参碱同时定量检测的方法，其特征在于：称取适量的空白茶叶样品，按照步骤s1中样品提取的方法处理，再用5％甲醇定容，即得空白基质溶液。

6.根据权利要求5所述的茶叶中苦参碱和氧化苦参碱同时定量检测的方法，其特征在于：标准储备液存储在-20℃环境中。

7.根据权利要求1所述的茶叶中苦参碱和氧化苦参碱同时定量检测的方法，其特征在于：步骤s3中，采用Hypersil GOLD C18柱分离，以流动相A和流动相B进行梯度洗脱，再采用柱温质谱，以电喷雾正离子源和多反应监测模式检测，外标法定量；

其中流动相A为甲醇，流动相B为乙酸铵甲酸溶液。

8.根据权利要求6所述的茶叶中苦参碱和氧化苦参碱同时定量检测的方法，其特征在于：所述乙酸铵甲酸溶液为5mmol/L乙酸铵水溶液，并且在5mmol/L乙酸铵水溶液中含有0.1％甲酸。

9.根据权利要求6所述的茶叶中苦参碱和氧化苦参碱同时定量检测的方法，其特征在于：步骤s3中，高效液相色谱-串联三重四极杆质谱的测定条件为：

(1)高效液相色谱为Hypersil GOLD C18，规格为柱长100mm，柱内径2.1mm,粒径1.9μm；

柱温30℃，

流速：0.2mL/min；

进样量：10μL；

流动相条件见表1：

表1 HPLC梯度洗脱

运行时间：8min；

(2)质谱条件为：

采用电喷雾正离子模式；

扫描方式：多反应监测；

干燥气温度：300℃；

干燥气流量：3L/min；

鞘气流量：15L/min；

毛细管温度350℃；

喷雾电压：3200V；

多反应监测模式下的质谱参数见表2

表2 多反应监测模式下的质谱参数