[发明专利]一种提高5-羟基色氨酸产量的方法

权利要求书

1.一种提高5-羟基色氨酸产量的方法，其特征在于：采用5-羟基色氨酸生产菌E.coliHTP10，在发酵中期产酸阶段减少通风量，控制溶氧在5%-40%，流加柠檬酸，保证BH4合成过程还原力充足，从菌体对数生长期开始进行补糖流加，流加糖速率5-6g/L.h；8-10h，流加糖速率7-8g/L.h；10-12h，流加糖速率9-10g/L.h；12-18h，流加糖速率11-12g/L.h；18-24h，流加糖速率10-11g/L.h；24-32h，流加糖速率9-10g/L.h，减少色氨酸累积。

2.根据权利要求1所述的提高5-羟基色氨酸产量的方法，其特征在于：具体步骤如下：

（1）活化培养：从-80℃冰箱中取出5-羟基色氨酸生产菌E.coli HTP10保菌管，传两代斜面，活化培养，采用的斜面培养基包括：葡萄糖1-3 g/L，蛋白胨5-10 g/L，牛肉膏5-10 g/L，酵母浸出粉2-5 g/L，氯化钠 2-5 g/L，琼脂粉15-30 g/L；

（2）种子培养：将活化菌株全部接种到种子罐，得到种子液，采用的种子培养基为：葡萄糖20-40 g/L，酵母浸出粉2-5 g/L，硫酸铵1-5 g/L，磷酸二氢钾1-5 g/L，无水硫酸镁0.5-2g/L，七水硫酸亚铁10-30 mg/L，一水硫酸锰10-30 mg/L，V_H 0.1-0.5 mg/L，V_B1 0.5-1 mg/L，微量元素混合液1-2 ml,消泡剂1 g/L，并用氨水将培养基调节并维持pH到6.7~7.0；

（3）发酵培养：接种12-16%的种子液到发酵罐，连续培养，中间补料，得到发酵液，采用的发酵培养基为：葡萄糖20-40 g/L，酵母浸出粉2-5 g/L，硫酸铵1-5 g/L，磷酸二氢钾1-5g/L，无水硫酸镁0.5-2 g/L，七水硫酸亚铁30-60 mg/L，一水硫酸锰20-40 mg/L，V_H 0.1-0.5 mg/L，V_B1 0.5-1 mg/L，微量元素混合液1-2 ml，用氨水将发酵罐培养调节并维持pH到6.7-7.0；其中，在发酵8h后，流加0.4-1%柠檬酸水溶液。

3.根据权利要求2所述的提高5-羟基色氨酸产量的方法，其特征在于：所述微量元素混合液组分含量为钼酸铵0.28mg/L，硼酸5mg/L，CoCl₂^.6H₂O 1.4mg/L，MnSO₄^.H₂O 0.5mg/L，CuSO₄^.7H₂O 0.5mg/L，ZnSO₄^.7H₂O 0.6mg/L，上述成分称量固体后溶解于1L水中，在 4℃保存。

4.根据权利要求1和2所述的提高5-羟基色氨酸产量的方法，其特征在于：中间补料为0.4-1%柠檬酸水溶液，流加策略为发酵罐配制培养基2.7L，从发酵8h开始流加300ml 0.4-1%柠檬酸水溶液，流加到发酵结束。

5.根据权利要求2所述的提高5-羟基色氨酸产量的方法，其特征在于：所述发酵罐基础培养条件：接种量600 ml，发酵体积3 L, 培养温度32℃，pH 6.8-7.0，转速与溶氧联动，发酵时间32 h。