[发明专利]一种新冠病毒疫苗的表达载体及其构建方法、应用和疫苗

说明书

本发明适用于生物技术领域，提供了一种新冠病毒疫苗的表达载体及其构建方法、应用和疫苗，该表达载体的构建方法包括以下步骤：将表达新冠病毒S蛋白与NP蛋白的核苷酸序列使用2A肽进行连接，合成融合基因；在融合基因的两端分别包含两个酶切位点，并装载到质粒，得到重组质粒；对重组质粒进行双酶切，切胶回收目的基因片段；对原始的质粒进行双酶切，切胶回收载体片段；将目的基因片段和载体片段进行连接，得到所述表达载体。本发明实施例通过同时表达冠状病毒S蛋白受体结合区与NP蛋白，使该表达载体感染的细胞不但可以诱导抗体反应还能诱导T细胞反应，从而有效诱导体液免疫和细胞免疫，为受试者提供更强的免疫保护。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种新冠病毒疫苗的表达载体及其构建方法、应用和疫苗。

背景技术

目前全球公共卫生面临的最大的问题是新发和再发传染病。冠状病毒就是这样一类能引发严重疾病的传染病毒，冠状病毒广泛存在于人类、哺乳动物和鸟类宿主，是一种具有包膜的RNA病毒，可以导致呼吸道、肠道、肝脏和神经系统疾病。目前的冠状病毒种株中可致命的人畜共患传染病病毒为严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合征病毒(MERS-CoV)。冠状病毒所致的爆发性烈性传染病具有传染性强、潜伏期长、发病症状不一、致命性等特点，对国民经济和人民生命安全造成了沉重的打击和致命威胁。其中，新冠病毒，即2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)，是目前新发的一种冠状病毒。

目前尚无批准的用于治疗或预防冠状病毒的疗法。几个国家和国际研究小组正在就各种预防和治疗干预措施进行合作。正在探索的潜在途径包括药物治疗，恢复期血浆治疗，基于干扰素的疗法，小分子药物，疫苗治疗。药物治疗，迄今临床应用的抗病毒药物种类极少，且其作用机制相似，大都是对活跃复制的病毒有效，而不能清除潜伏状态或非复制期病毒。恢复血浆治疗是一种经典的适应性免疫疗法，在一个多世纪以来一直被用于许多传染病的预防和治疗，但是，存在一些涉及确定捐赠者和反复进行新冠肺炎拭子检测方面的挑战。疫苗是对付病毒的有效手段，但是目前还没有有效预防SARS-CoV-2感染或任何其他人类冠状病毒感染的疫苗。

国内外多家企业和科研机构正在研发各类新冠疫苗，主要技术路线包括RNA、DNA、腺病毒载体、灭活、减毒和重组蛋白六类，每一类都有多个候选疫苗在平行进行饱和式研发。利用已公布的新型冠状病毒毒株，制备纯化的病毒株灭活疫苗为一种制备疫苗的好思路。但是，由于制备灭火疫苗工艺复杂且对生产环境要求极高。此外，更重要的是由于灭活疫苗存在感染风险，而且本身冠状RNA病毒变异速度快，其保护效果有限，只能起到预防作用，对于无症状感染者没有作用。其他疫苗疫苗设计大多针对新冠病毒的S蛋白，主要目的是诱导抗体进而阻止病毒S蛋白和细胞ACE2受体结合进而阻断病毒的入侵。

如果一种疫苗接种后，既能在受试者产生的中和性抗体，又能激发较好的T细胞免疫反应，那么相较于其他疫苗，该疫苗将对接种人群提供更大的短期保护力。如果还能够激发一定程度的免疫记忆(T细胞、B细胞)，那么就有更大概率具有长期保护力。因此，目前亟待研究一种同时表达诱导体液免疫和细胞免疫的疫苗。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种新冠病毒疫苗的表达载体，旨在解决背景技术中提出的问题。

本发明实施例是这样实现的，一种新冠病毒疫苗的表达载体，所述表达载体能够同时表达新冠病毒的S蛋白和NP蛋白。

作为本发明实施例的另一种优选方案，所述表达载体所表达的蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示。

本发明实施例的另一目的在于提供一种上述新冠病毒疫苗的表达载体的构建方法，其包括以下步骤：

将表达新冠病毒S蛋白与NP蛋白的核苷酸序列使用2A肽进行连接，合成融合基因；

在融合基因的两端分别包含两个酶切位点，并装载到质粒，得到重组质粒；

对重组质粒进行双酶切，切胶回收目的基因片段；