[发明专利]一种A型塞内卡病毒SVA/HeB全长感染性cDNA克隆及其制备方法与应用有效
| 申请号： | 202110673091.5 | 申请日： | 2021-06-17 |
| 公开（公告）号： | CN113308480B | 公开（公告）日： | 2022-07-29 |
| 发明（设计）人： | 袁万哲;郭笑然;赵款;雷白时;张武超;刘小娜 | 申请（专利权）人： | 河北农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/41 | 分类号： | C12N15/41;C12N15/63;C12N7/01;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 李兴林 |
| 地址： | 071000 *** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 型塞内卡 病毒 sva heb 全长 感染性 cdna 克隆 及其 制备 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种A型塞内卡病毒SVA/HeB全长感染性cDNA克隆的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）载体的改造：选用低拷贝载体pOK12作为A型塞内卡全长感染性cDNA克隆构建的载体，CMV增强子和β-actin启动子序列通过
（2）以A型塞内卡病毒SVA/HeB的cDNA为模板，分别设计、合成覆盖SVA/ HeB病毒全基因组的三对重叠引物AF/AR、BF/BR和CF/CR；
所述AF的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述AR的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，用引物AF/AR扩增，获得第一个基因片段A片段；所述BF的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述BR的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，用引物BF/BR扩增获得第二个基因片段B片段；所述CF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述CR的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，用引物CF/CR扩增获得第三个基因片段C片段；
（3）将pOK-CMV-Actin利用
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