[发明专利]一种检测赭曲霉毒素A的电化学发光免疫传感器的制备和应用

权利要求书

1.一种检测赭曲霉毒素A的修饰电极的制备方法，其特征是包括以下步骤：

（1）将蛋壳粉与HAuCl₄溶液混合在一起，使蛋壳粉充分吸收金离子；

（2）吸收金离子后的蛋壳粉干燥，焙烧，得到Au/CaCO₃纳米颗粒；

（3）将Au/CaCO₃纳米颗粒分散到Nafion溶液中，得到悬浮液，将该悬浮液振荡、离心、洗涤，得到Au/CaCO₃/Nafion纳米颗粒；

（4） 将Au/CaCO₃/Nafion纳米颗粒分散在水中，所得悬浮液滴到电极表面，干燥，得Au/CaCO₃/Nafion修饰电极；

（5）将Au/CaCO₃/Nafion修饰电极浸入Ru(bpy)₃²⁺溶液中，孵育后取出后清洗干燥，得Ru(bpy)₃²⁺/Au/CaCO₃/Nafion修饰电极；

（6）在Ru(bpy)₃²⁺/Au/CaCO₃/Nafion修饰电极表面滴加赭曲霉毒素A 纳米抗体Nb28溶液，进行孵育，孵育后清洗，然后将修饰电极与1-1.5 wt%的BSA溶液孵育，孵育后清洗干燥，得检测赭曲霉毒素A的修饰电极。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：步骤（1）中，HAuCl₄溶液的浓度为5-15mmol/L，蛋壳粉与HAuCl₄溶液的用量关系为：1g：5-10ml；步骤（3）中，Nafion溶液的浓度为2-5wt%，Au/CaCO₃纳米颗粒与Nafion溶液的用量关系为1 mg：1-2 mL。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：步骤（1）中，将蛋壳粉与HAuCl₄溶液在搅拌下混合10-12h，使蛋壳粉充分吸收金离子；步骤（2）中，吸收金离子后的蛋壳粉在500-550℃下煅烧1-2 h。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：步骤（4）中，Au/CaCO₃/Nafion纳米颗粒在水中的浓度为1-2 mg/mL，将5-10 μL悬浮液滴到电极表面；步骤（5）中，Ru(bpy)₃²⁺溶液的浓度为15-25 mmol/L，Au/CaCO₃/Nafion修饰电极浸入Ru(bpy)₃²⁺溶液中，室温下孵育1-1.5h。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：步骤（6）中，赭曲霉毒素A 纳米抗体Nb28的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

6.根据权利要求1或5所述的制备方法，其特征是：步骤（6）中，在Ru(bpy)₃²⁺/Au/CaCO₃/Nafion修饰电极表面滴加4-5 μL浓度为20-25 μg/mL的赭曲霉毒素A 纳米抗体Nb28溶液，37 ℃孵育4-5 h，孵育后清洗，然后将修饰电极与1-1.5 wt%的BSA溶液在室温下孵育0.5 -1h。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：所述电极为玻碳电极。

8.按照权利要求1-7中任一项所述的检测赭曲霉毒素A的修饰电极的制备方法制得的检测赭曲霉毒素A的修饰电极，以及该修饰电极在检测赭曲霉毒素A中的应用。

9.一种检测赭曲霉毒素A的电化学发光免疫传感器，其特征是：包括工作电极，所述工作电极为权利要求8所述的检测赭曲霉毒素A的修饰电极。

10.一种检测赭曲霉毒素A的方法，其特征是：以权利要求8所述的检测赭曲霉毒素A的修饰电极为工作电极，以铂电极为辅助电极，以甘汞电极作为参比电极，以共反应剂三正丙胺溶液作为检测溶液，通过循环伏安法和电化学发光法共同检测赭曲霉毒素A的含量；优选的，扫描电位为0.2V~1.35V，扫描速率为0.1V/s，三正丙胺溶液的浓度为0.03-0.06 mmol/L。