[发明专利]一种检测生物硫醇的近红外荧光探针及其制备方法

权利要求书

1.一种检测生物硫醇的近红外荧光探针，其特征在于，荧光探针具有如下式(Ⅰ)所示结构式：

(Ⅰ)。

2.一种如权利要求1所述的检测生物硫醇的近红外荧光探针的制备方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：

步骤1，以异佛尔酮和丙二腈为原料，通过Knoevenagel缩合反应合成中间体(3,5,5-三甲基环己-2-烯亚基)丙二腈；

步骤2，以2，4-二羟基苯甲醛和丙酸钠为原料，通过环化和水解反应合成中间体7-羟基-3-甲基-香豆素；具体为：

将2，4-二羟基苯甲醛和丙酸钠及催化剂三乙胺溶于乙酸酐中，加热回流12h，向反应液中注入水，抽滤得到砖红色固体，洗涤后烘干，柱色谱分离纯化，将所得产物溶解于二氯甲烷中继续反应，并加入乙酸酐和吡啶作为催化剂，室温下搅拌24h，之后使用二氯甲烷和水萃取，收集有机相并使用无水硫酸钠干燥，过滤后减压旋转蒸发去除有机溶剂并使用柱色谱分离纯化，得到中间体7-羟基-3-甲基-香豆素；2，4-二羟基苯甲醛和丙酸钠的摩尔比为1：1；

步骤3，以步骤2中所得中间体7-羟基-3-甲基-香豆素和N-溴代丁二酰亚胺为原料，通过卤化和水解反应合成中间体7-羟基-3-醛基-香豆素；具体为：

以偶氮二异丁腈为自由基反应引发剂，将其与7-羟基-3-甲基-香豆素和N-溴代丁二酰亚胺溶于四氯化碳中，加热回流8h，减压旋蒸去除有机溶剂，加入乙酸钠使其溶解于乙酸酐，加热回流12h，之后加入盐酸溶液继续搅拌，冷却至室温，抽滤，冰水洗涤，得到棕色固体，即为中间体7-羟基-3-醛基-香豆素；7-羟基-3-甲基-香豆素和N-溴代丁二酰亚胺的摩尔比为1：2；

步骤4，以步骤1和步骤3所得中间体(3,5,5-三甲基环己-2-烯亚基)丙二腈和7-羟基-3-醛基-香豆素为原料，经过Knoevenagel缩合反应合成中间体(3-(7-羟基-3-乙烯基香豆素)-5 , 5-二甲基环己-2-烯亚基)丙二腈；具体为：

将(3,5,5-三甲基环己-2-烯亚基)丙二腈和7-羟基-3-醛基-香豆素及催化剂溶于无水乙醇中，在50℃条件下反应4h，反应结束后冷却至室温，过滤得到红色固体沉淀，并用无水乙醇反复洗涤，即可得到中间体(3-(7-羟基-3-乙烯基香豆素)-5 , 5-二甲基环己-2-烯亚基)丙二腈；(3,5,5-三甲基环己-2-烯亚基)丙二腈和7-羟基-3-醛基-香豆素的摩尔比为1：1，催化剂为哌啶；

步骤5，以步骤4所得中间体(3-(7-羟基-3-乙烯基香豆素)-5 , 5-二甲基环己-2-烯亚基)丙二腈和丙烯酰氯为原料，合成荧光探针。

3.根据权利要求2所述的一种检测生物硫醇的近红外荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，具体为：

将异佛尔酮、丙二腈及催化剂溶于N,N-二甲基甲酰胺中，以氩气作为保护气体，在120℃的条件下搅拌6h，反应结束后冷却至室温，将反应混合溶液注入冰水中，析出棕色固体，干燥并使用柱色谱分离纯化，得到中间体(3,5,5-三甲基环己-2-烯亚基)丙二腈；

催化剂为乙酸酐、冰醋酸和哌啶混合而成的粘稠液；异佛尔酮与丙二腈的摩尔比为1：1。

4.根据权利要求2所述的一种检测生物硫醇的近红外荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤5中，具体为：

将(3-(7-羟基-3-乙烯基香豆素)-5 , 5-二甲基环己-2-烯亚基)丙二腈和丙烯酰氯及催化剂溶于二氯甲烷，室温下搅拌，TLC监测反应进程至结束，减压旋干溶剂，柱色谱分离纯化，即可得到荧光探针；(3-(7-羟基-3-乙烯基香豆素)-5 , 5-二甲基环己-2-烯亚基)丙二腈与丙烯酰氯的摩尔比为1：2，催化剂为三乙胺。