[发明专利]含有黄瓜花叶病毒Fny分离物RNA2的突变型质粒载体及其应用有效
| 申请号： | 202110671171.7 | 申请日： | 2021-06-17 |
| 公开（公告）号： | CN113388637B | 公开（公告）日： | 2023-03-28 |
| 发明（设计）人： | 原雪峰;刘珊珊;于成明;耿国伟 | 申请（专利权）人： | 山东农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;C12N15/83;C12N15/40 |
| 代理公司： | 济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业) 37240 | 代理人： | 薛鹏喜 |
| 地址： | 271018 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 含有 黄瓜花叶病毒 fny 分离 rna2 突变型 质粒 载体 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.含有黄瓜花叶病毒Fny分离物RNA2的突变型质粒载体pCCFR2-2bPTⅢ作为弱毒疫苗在保持黄瓜花叶病毒弱毒性和插入外源片段的遗传稳定性中的应用；
所述突变型质粒载体pCCFR2-2bPTⅢ含有CMVFny分离物突变型RNA2；所述CMVFny分离物突变型RNA2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述突变型质粒载体pCCFR2-2bPTⅢ由如下方法构建而成：
以CMVFny RNA2侵染性克隆质粒pCB301-CMVFny-R2为模板，利用反向PCR扩增技术获得线性化载体；利用BamHI酶切与连接技术，最终获得突变型质粒载体pCCFR2-2bPTⅢ；
所述突变型质粒载体pCCFR2-2bPTⅢ是将RNA2的2662-2751位核苷酸序列缺失，然后再依次引入双终止密码子TAATAG及多克隆酶切位点GGATCCACTAGTCCCGGG；
用于反向PCR扩增的引物序列分别如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；
反向PCR扩增的条件为：98℃变性10s，68℃延伸7min 30s，30个循环；4℃保存；
插入外源片段的长度为350bp。
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