[发明专利]一种子宫内膜间充质干细胞的分离培养方法及应用

权利要求书

1.一种子宫内膜间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)子宫内膜的采集：月经期内，采集经血，经过滤并用等渗溶液冲洗后将得到的组织块转移至保护液中；

2)子宫内膜的清洁：将子宫内膜组织用等渗溶液冲洗，剩下白色的子宫内膜组织后再进行杀菌消毒和冲洗；

3)子宫内膜组织的培养：将子宫内膜组织剪成碎块，放入装有完全培养基的培养瓶中悬浮培养，并定时摇晃培养瓶；

4)细胞收集培养：当子宫内膜组织碎块长成光滑的球形时，消化子宫内膜组织并收集细胞进行培养。

2.根据权利要求1所述的一种子宫内膜间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，步骤1)，采学时间为月经周期的第二天，所述保护液为含有质量浓度为300～600mg/L青霉素和质量浓度为400～800mg/L链霉素的DMEN/F12培养基。

3.根据权利要求1所述的一种子宫内膜间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，组织块转移至保护液中后在4～8℃的条件下12小时内送至实验室进行操作。

4.根据权利要求1所述的一种子宫内膜间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，步骤2)，将子宫内膜组织浸泡于75％酒精中20～40秒，进行杀菌消毒，再用生理盐水冲洗子宫内膜组织。

5.根据权利要求1所述的一种子宫内膜间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述等渗溶液包括生理盐水、D-Hank'S液或PBS。

6.根据权利要求1所述的一种子宫内膜间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，步骤3)，所述子宫内膜组织碎块的面积为1mm²，培养时间为7-10天。

7.根据权利要求1所述的一种子宫内膜间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：

5)消化收集步骤4)培养的细胞为第一代细胞并培养；

6)消化收集步骤5)培养的细胞为第二代细胞并培养；

7)将步骤6)得到的细胞进行传代培养后进行细胞表型鉴定。

8.根据权利要求7所述的一种子宫内膜间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，消化采用质量浓度为0.125％～0.25％的胰蛋白酶。

9.根据权利要求7所述的一种子宫内膜间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述传代培养的细胞接种浓度为0.5×10⁴/cm²～1.5×10⁴/cm²。

10.权利要求1-9任一项所述的一种子宫内膜间充质干细胞的分离培养方法在获取子宫内膜间充质干细胞中的应用。