[发明专利]一种定量测定生物样品中利马前列素的方法

权利要求书

1.一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：采用超高效液相色谱-差分离子淌度-四级杆飞行时间高分辨串联质谱的分析方法，测定生物样品中的利马前列素；其中，差分离子淌度池加装在质谱的离子源和第一四级杆之间；选定气相裂解反应m/z379.2484→299.2380Da的质量碎片作为定量离子对。

2.根据权利要求1所述的一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：采用SWATH扫描方式，SWATH Q1扫描范围：378.0→380.0Da；SWATH窗口宽度：2Da。

3.根据权利要求1所述的一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：在采用超高效液相色谱-差分离子淌度-四级杆飞行时间高分辨串联质谱分析之前先用固相萃取初步去除血浆中内源性物质的干扰。

4.根据权利要求1所述的一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：方法步骤包括A、待测生物样品处理；B、利马前列素标准曲线制备；C、生物样品中利马前列素含量上机测定；

其中，A、待测生物样品处理，步骤如下：

1)使用环氧合酶抑制剂处理待测定的生物样品；

2)处理过后的生物样品加入抗吸附溶液、内标溶液、水/乙酸混合溶液，涡流混合，离心；

3)离心所得上清液加到已活化的Bond Elut C18固相萃取柱中，依次加纯水、水/甲醇混合溶液淋洗；

4)将Bond Elut C18固相萃取柱吸附物用乙酸乙酯洗脱到已活化的Bond Elut DEA固相萃取柱上，加水/乙酸混合溶液淋洗；

5)将Bond Elut DEA固相萃取柱吸附物用水/甲醇/乙酸混合溶液洗脱，收集洗脱液，40℃氮气流下吹干，残留物加入乙酸铵/乙酸/乙腈混合溶液复溶，涡流混合后，取复溶液进行超高效液相色谱-差分离子淌度-四极杆飞行时间串联质谱分析。

5.根据权利要求4所述的一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：A、待测生物样品处理步骤1)中所述环氧合酶抑制剂为0.1mg/mL阿司匹林和0.1mg/mL吲哚美辛。

6.根据权利要求4所述的一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：A待测生物样品处理步骤2)中所述抗吸附溶液为PGF2α与PGE1的混合溶液，其中PGF2α浓度范围100～200ng/mL，PGE1的浓度范围100～200ng/mL。

7.根据权利要求4所述的一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：步骤C测定的色谱条件：Waters Acquity超高效液相色谱系统；色谱柱：CAPCELL PAK C18柱，100mm×2.0mm I.D.，5μm粒径；流动相：水相为5％乙腈+95％水，且水中含醋酸铵及乙酸，pH3～7、有机相为乙腈；梯度洗脱；柱温30～50℃；流速0.2～0.4mL/min；进样量20μL。

8.根据权利要求7所述的一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：色谱条件中梯度洗脱程序起始有机相比例为5％，最高有机相比例为95％，且有机相比例从5％升高至95％的速率为22.5％/min。

9.根据权利要求4所述的一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：步骤C测定的质谱条件：Triple TOF^TM6600⁺型串联质谱仪，配有ESI离子化源、SelexION差分离子淌度系统；负离子方式检测；离子喷射电压-4500±500V；温度400±100℃；源内气体1：氮气压力40±15psi；气体2：氮气压力40±15psi；气帘气体：氮气压力35±10psi；解簇电压：-100±10V；DMS温度：Medium；改性剂：异丙醇；改性剂流速：low；分离电压：3800±400V；补偿电压：-8±2；DMS分辨率增强：open；；高灵敏度模式；采用SWATH扫描方式，SWATH Q1扫描范围：378.0→380.0Da；SWATH窗口宽度：2Da碰撞能量为-30±10eV。

10.根据权利要求1所述的一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：所述的生物样品为血浆、组织液、尿液。