[发明专利]一种VAV2基因缺失的肿瘤细胞系

说明书

本发明提供了一种VAV2基因缺失的肿瘤细胞系及其在筛选和/或评价/制备肿瘤治疗药物，开发肿瘤药物靶点，制备肿瘤诊断试剂，开发肿瘤治疗新技术，开发检测肿瘤相关生物工程产品中的应用。所述VAV2基因缺失是通过Crispr/cas9敲除技术实现的，本发明的细胞系具有良好的细胞特性，并且其特性优于市售的细胞系。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种VAV2基因缺失的肿瘤细胞系及其构建方法。

背景技术

食管癌目前尚缺乏细胞模型，尤其是小鼠来源的肿瘤细胞系，本发明构建了一株小鼠来源的食管癌细胞系并命名为NCCE2，弥补该领域空白。

VAV2是一个重要的癌基因，目前有多项研究表明其影响肿瘤的增殖迁移等恶性表型，靶向VAV2可能是将来肿瘤治疗领域的一个重要方向。我们通过Crispr技术获得了VAV2基因缺失的小鼠，并且通过诱导成瘤而后继续培养癌组织得到了稳定表达的细胞系，该细胞系具有良好的细胞特性，并且其特性优于市售的细胞系。

CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats)是在细菌中发现的适应性免疫反应系统(Adaptive immune system)，能有效抵抗噬菌体(Bacteriophage)等对细菌造成的损伤。在这套系统的基础上，科学家发展出一种新的CRISPR/Cas基因组编辑技术。现在所广泛使用的CRISPR/cas9系统是由II型CRISPR改造而来，并应用到分子生物学的相关研究中，成为一种可用于基因组编辑的分子生物学利器。CRISPR基因组编辑系统通过sgRNA上携带的靶点序列识别特定DNA序列，这种方式决定了CRISPR系统具有很强的特异性，由于其没有物种的限制，已经成功在多种动物和植物中实现了基因的精确编辑。

发明内容

细胞系

本发明提供了一种食管癌细胞系，所述细胞系命名为VAV2基因缺失小鼠食管癌细胞系NCCE2，于2021年3月3日由中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NO：C202140。

生物材料样品的保藏信息：

保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)；

地址：中国武汉，武汉大学；

保藏日期：2021年3月3日；

保藏编号：CCTCC NO：C202140；

分类命名：VAV2基因缺失小鼠食管癌细胞系NCCE2。

方法

本发明提供了一种构建癌细胞系的方法，所述方法包括如下步骤：

1)构建包含VAV2完整或部分基因的载体；

2)使用载体敲除模型生物的VAV2基因，获得基因敲除的模型生物；

3)诱导基因敲除的模型生物成瘤；

4)继续培养肿瘤组织，获得癌细胞系。

优选地，所述癌细胞系是食管癌细胞系。

优选地，所述癌细胞系是前述保藏的NCCE2细胞系

优选地，所述VAV2完整或部分基因是gRNA，所述gRNA有引导基因编辑蛋白到特定位点进行基因编辑的功能；所述编辑包括敲除(KO)、插入、点突变。

优选地，所述载体上有Cas9的核酸序列。

优选地，所述载体上还有其他的调节元件和/或功能组分。