[发明专利]一种基于非靶向代谢组学鉴别25头与80头以下三七的方法

权利要求书

1.一种基于非靶向代谢组学鉴别25头与80头以下三七的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、三七样品代谢产物的提取；

以甲醇溶液为溶剂浸提三七代谢产物，得到供试品；

S2、非靶向成分测定；

采用UHPLC LTQ Oribitrap MS联用技术对三七代谢产物提取液进行非靶向成分测定，得到原始数据；

测定方法具体是：

色谱条件：Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱，色谱柱规格2.1mm×100mm，1.8μm；流动相A为含0.1％甲酸的水溶液，流动相B为乙腈，洗脱梯度为0-8min，98％-65％A；8-19min，65％-60％A，19-27min，60％-10％A；27-30min，10％A；柱温30℃，流速0.3ml/min，进样量3μl；质谱条件：离子源为电喷雾电离源，正、负离子模式分别扫描，加热器温度为350℃，毛细管温度为350℃，毛细管电压为35V，喷雾电压为3.5kV，鞘气流速40arb，辅助气流速10arb；供试品和对照品溶液一级质谱在FT模式下进行全扫描，扫描范围100-1200，二级质谱采用数据依赖性扫描；质谱数据采用Xcalibur软件采集和分析；

S3、数据的处理与分析；

对原始数据依次进行预处理和多元统计学分析；

S4、数据挖掘发现差异性代谢物；

以变量重要性投影指标为筛选指标筛选差异性代谢物。

2.根据权利要求1所述的一种基于非靶向代谢组学鉴别25头与80头以下三七的方法，其特征在于，步骤S1的提取方法是将三七粉碎并过40目筛，称取过筛后的三七粉末0.600g，加入20ml的体积分数70％的甲醇溶液，超声提取40min，分离提取液，提取液过0.22μm微孔滤膜，得到供试品。

3.根据权利要求1所述的一种基于非靶向代谢组学鉴别25头与80头以下三七的方法，其特征在于，步骤S3中所述预处理是通过Progenesis QI软件提取UHPLC LTQ OribitrapMS采集到的25头和80头以下三七的质谱数据，并对数据进行包括峰对齐、数据归一化和质控的预处理。

4.根据权利要求1所述的一种基于非靶向代谢组学鉴别25头与80头以下三七的方法，其特征在于，所述多元统计学分析包括主成分分析，具体是将预处理得到的数据导入到Ezinfo软件，通过主成分分析方法对样品类别、相似性、差异性进行分析，表征样品差异。

5.根据权利要求1所述的一种基于非靶向代谢组学鉴别25头与80头以下三七的方法，其特征在于，步骤S4中所述变量重要性投影指标包括p值、vip值和Fold Change值，使用Progenesis QI软件计算成分p值、Fold Change值，通过正交偏最小二乘判别分析计算vip值，首先筛选p值＜0.05，vip＞1，Fold Change＞1.5的成分，再进一步剔除在25头组和80头以下三七组中存在含量高低交叉的成分，最终确立界分25头和80头以下三七的差异性代谢物。