[发明专利]一种重组毕赤酵母分泌表达左聚糖蔗糖酶的方法及其应用有效
| 申请号： | 202110666077.2 | 申请日： | 2021-06-16 |
| 公开（公告）号： | CN113293153B | 公开（公告）日： | 2023-06-06 |
| 发明（设计）人： | 杨辉;仝秋平;陈硕昌;丛豪;郭晓磊 | 申请（专利权）人： | 广西大学 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/81;C12N15/90;C12P19/18;C12P19/04;C12R1/84 |
| 代理公司： | 广西汇佳知识产权代理事务所(普通合伙) 45125 | 代理人： | 滕艺琼 |
| 地址： | 530004 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 酵母 分泌 表达 聚糖 蔗糖 方法 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种重组毕赤酵母分泌表达左聚糖蔗糖酶的方法，其特征在于，将左聚糖蔗糖酶(Levansucrase)基因克隆到毕赤酵母整合质粒上，得到的重组质粒线性化后转化到宿主毕赤酵母，通过同源重组将左聚糖蔗糖酶(Levansucrase)基因整合到毕赤酵母染色体中，挑选出携带高拷贝外源基因的重组毕赤酵母菌株，即得；
其中，所述的左聚糖蔗糖酶基因来源于枯草芽孢杆菌，所述左聚糖蔗糖酶基因的基因序列如SEQ ID NO.1所示；
其中，所述的毕赤酵母整合质粒为携带α-MF信号肽的pPIC9K整合质粒，该质粒将α-MF信号肽与外源基因同时整合到毕赤酵母染色体上；所述的宿主毕赤酵母为毕赤酵母GS115菌株；所述的线性化位点选择为SacI。
2.根据权利要求1所述的方法得到的重组毕赤酵母在生产左聚糖方面的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述重组毕赤酵母在生产左聚糖方面的应用操作方法为所得重组毕赤酵母经甲醇诱导培养，离心，上清液作为酶制剂，以蔗糖为底物，酶法合成高分子量的左聚糖。
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