[发明专利]一种生产乙醇的基因工程蓝细菌

权利要求书

1.一种生产乙醇的基因工程蓝细菌，其特征在于，所述蓝细菌中含有活性的启动子可操作的连接第一基因和第二基因；其中，第一基因为丙酮酸脱羧酶基因，其序列如SEQ IDNO.3 所示，第二基因为NADPH依赖型醛还原酶基因，其序列如SEQ ID NO.4所示；所述的具有活性的启动子是光强启动子Pcpc560，其序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的蓝细菌，其特征在于，所述蓝细菌引入NADP依赖型苹果酸脱氢酶maeB基因，敲除slr1176基因；所述maeB基因的序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1所述的蓝细菌，其特征在于，所述蓝细菌通过基因手段使光强启动子Pcpc560驱动丙酮酸脱羧酶及NADPH依赖型醛还原酶的一个和/或多个基因位点表达。

4.一种生物合成乙醇的构建体，其特征在于，所述构建体包含与在蓝细菌中具

有活性的启动子可操作的连接第一基因和第二基因；其中，第一基因为丙酮酸脱羧酶基因，其序列如SEQ ID NO.3 所示，第二基因为NADPH依赖型醛还原酶基因，其序列如SEQID NO.4所示；所述的具有活性的启动子是光强启动子Pcpc560，其序列如SEQ ID NO.1所示。

5.根据权利要求4所述的构建体，其特征在于，所述构建体中引入NADP依赖型苹果酸脱氢酶maeB基因，同时敲除slr1176基因；所述maeB基因的序列如SEQ ID NO.2所示。

6.根据权利要求4所述的构建体，其特征在于，所述构建体在两端分别具有蓝细菌基因的上游片段和下游片段，从而所述构建体可以通过同源重组整合入蓝细菌基因组中所述蓝细菌基因所在的位置，所述蓝细菌基因的上游片段和下游片段为集胞藻PCC6803的slr1776基因的N-末端序列和C-末端序列，或集胞藻PCC6803的slr0301基因的N-末端序列和C-末端序列；所述slr1176基因的N-末端序列如SEQ ID NO.5所示，slr1176基因的C-末端序列如SEQ ID NO.6所示；所述slr0301基因的N-末端序列如SEQ ID NO.7所示，slr0301基因的C-末端序列如SEQ ID NO.8所示。

7.一种重组载体，其特征在于，其包含权利要求4~6任一项的构建体。

8.包含权利要求4~6任一项的构建体或权利要求7的重组载体的菌株。

9.一种在蓝细菌中生产乙醇的方法，其特征在于，将权利要求4~6任一项的构建体导入集胞藻PCC6803中，培养后获得基因工程蓝藻，从培养物中获得乙醇。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的集胞藻PCC6803中还包含有用于筛选蓝细菌转化体的标记基因。