[发明专利]基于高效液相色谱法检测环核苷酸磷酸二酯酶抑制剂活性的方法在审
| 申请号： | 202110660191.4 | 申请日： | 2021-06-15 |
| 公开（公告）号： | CN113376287A | 公开（公告）日： | 2021-09-10 |
| 发明（设计）人： | 徐剑;巫岳;石万银;郑向炜;杨跃军;刘源才 | 申请（专利权）人： | 劲牌有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86 |
| 代理公司： | 北京文苑专利代理有限公司 11516 | 代理人： | 胡颉 |
| 地址： | 435000 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 高效 色谱 检测 环核苷酸磷酸二酯酶 抑制剂 活性 方法 | ||
1.基于高效液相色谱法检测环核苷酸磷酸二酯酶抑制剂活性的方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一、将环核苷酸溶解于Tris-HCl缓冲溶液中，得到环核苷酸溶液；
步骤二、将环核苷酸磷酸二酯酶溶解于Tris-HCl缓冲溶液中，得到环核苷酸磷酸二酯酶溶液，预先于35℃水浴中温育3～10min，与不同浓度的环核苷酸磷酸二酯酶抑制剂混合均匀，得到混合溶液；
步骤三、将步骤一中的环核苷酸溶液预先于35℃水浴中温育3～10min，然后将步骤二中的混合溶液加入到环核苷酸溶液中，形成反应体系；
步骤四、将步骤三中的反应体系于35℃水浴温育，然后于100℃水浴加热，得到最终溶液；
步骤五、将最终溶液进样到高效液相色谱仪中，检测环核苷酸浓度，借此推算出环核苷酸磷酸二酯酶抑制剂活性。
2.根据权利要求1所述基于高效液相色谱法检测环核苷酸磷酸二酯酶抑制剂活性的方法，其特征在于：所述Tris-HCl缓冲溶液浓度为40-60mM,pH＝8。
3.根据权利要求1所述基于高效液相色谱法检测环核苷酸磷酸二酯酶抑制剂活性的方法，其特征在于：所述反应体系中包含浓度为0.01～0.5μg/mL的环核苷酸磷酸二酯酶溶液，终浓度为0.5～150μg/mL的环核苷酸溶液。
4.根据权利要求1所述基于高效液相色谱法检测环核苷酸磷酸二酯酶抑制剂活性的方法，其特征在于：所述步骤五中，高效液相色谱仪使用KromasilC18色谱柱，4.6mm×250mm,粒度5μm。
5.根据权利要求4所述基于高效液相色谱法检测环核苷酸磷酸二酯酶抑制剂活性的方法，其特征在于：所述步骤五中，使用的流动相为90％缓冲溶液，10％甲醇。
6.根据权利要求5所述基于高效液相色谱法检测环核苷酸磷酸二酯酶抑制剂活性的方法，其特征在于：所述缓冲溶液为6.8mg/mL的磷酸二氢钾水溶液。
7.根据权利要求6所述基于高效液相色谱法检测环核苷酸磷酸二酯酶抑制剂活性的方法，其特征在于：所述高效液相色谱分仪中的流动相流速为1ml/min。
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