[发明专利]一种基于量子点免疫荧光检测试剂盒制备方法

说明书

本发明涉及生物技术相关技术领域，通过在玻璃纤维膜的上表面从左到右依次设置有KIM‑检测线、NGAL检测线、mALB检测线和质控线；玻璃纤维膜的外部套接设置有卡壳；卡壳的左侧上表面开设加工有加样孔；KIM‑检测线和NGAL检测线、NGAL检测线和mALB检测线之间的距离为4至6毫米；mALB检测线和质控线之间的距离为3至4毫米；在玻璃纤维膜正上方的所述卡壳上表面位置开设加工有观测口；制备过程经过溶液配制以及微球活化处理并进行不同抗体偶联液配制再将其附着到对应检测线上等处理步骤，本发明能够提供一种稳定性好、量子点的荧光寿命长、特异性强以及灵敏度高的基于量子点免疫荧光检测试剂盒及其制备方法。

技术领域

本发明属于生物技术相关技术领域，具体涉及一种基于量子点免疫荧光检测试剂盒制备方法。

背景技术

肾损伤疾病如急性肾功能衰竭或慢性肾功能衰竭，可由各种不同的原因如疾病，损伤等引起，急性肾损伤（英文简称AKI）是指肾功能的快速丧失，目前临床上通过尿量减少，血清肌酐上升和尿素氮升高来诊断急性肾损伤，但有一定的延迟性，急性肾损伤（英文简称AKI）的人群发病率高，全球每年约有两百万人死于AKI，危重症患者，尤其是老年人近年AKI的发生率日益增加，主要原因在于无法早期诊断AKI，错过了最佳的治疗“时间窗”，为了提高诊断水平，早期发现急性肾损伤的生物标志物如肾损伤分子-1(KIM-1)，中性粒细胞明胶酶脂质相关运载蛋白（NGAL），尿微量白蛋白（mALB）最近被引入临床实验。

肾损伤分子-1（kidneyinjurymolecule-1，KIM-1）是1型跨膜糖蛋白，属于免疫球蛋白基因超家族；在正常的肾组织中检测不到KIM-1，而在人类和啮齿类动物发生肾损伤（缺血或中毒）时，其高表达于近端肾小管；KIM-1的胞外域非常稳定，能在尿液中保存较久，因此在肾损伤时，可以在病理组织以及尿液中检测到；KIM-1对于缺血性或肾毒性肾损伤更为特异，不受氮质血症、尿路感染或慢性肾病的影响；KIM-1可作为一种检测早期肾损伤的可靠分子标志物，在临床上具有广阔的应用前景。

中性粒细胞明胶酶脂质相关运载蛋白（NGAL）是1993年在研究中性粒细胞明胶酶时发现的一种相对分子量为25000的蛋白质，在正常情况下表达较低，但在各种原因导致的肾损伤时，NGAL大量表达于缺血的近端肾小管上皮细胞；研究发现，对于心脏手术后出现AKI的患者，血液和尿液中的NGAL和术前相比明显升高，并且和患者肾损伤程度直接相关；不仅如此，在肾毒性的相关性研究中也发现，NGAL可以早期预测肾损伤的程度。

尿中出现了微量蛋白，称尿微量白蛋白（mALB）；肾脏每天需要将血液中的代谢物过滤掉，肾脏滤过膜的孔径为5.5nm，只允许小分子物质水、电解质（钾、钠、氯）和代谢废物（肌酐、尿素氮、尿酸等）通过；而血液中的白蛋白直径为7.2nm，不能通过滤过孔，所以尿中没有蛋白质。

目前早期诊断AKI面临的挑战是缺乏敏感性高、特异性好，在肾损伤的早期阶段能准确诊断AKI的标志物；现有临床实践中用于诊断AKI的标志物是血肌酐和尿量，但上述两个指标存在局限性：血肌酐水平要待肾功能丧失超过一大半时才出现升高，且受诸多非肾损伤因素（如药物、病人营养状态、机体肌肉量等）影响，不是AKI早期敏感指标；每小时尿量的精确测定只有在留置导尿管的病人中才能进行，且受利尿剂用量和血容量波动等因素影响大，普适性低且特异性不高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种稳定性好、抗漂白能力强、量子点的荧光寿命长、特异性强以及灵敏度高的基于量子点免疫荧光检测试剂盒及其制备方法。

下面关于后续技术方案表述中涉及的专业名词解释如下：

KIM-1：肾损伤分子-1；

NGAL：中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白；

mALB：尿微量白蛋白；

AKI：急性肾损伤；

PB：磷酸缓冲液；