[发明专利]用于猪囊尾蚴病的上转发光颗粒检测卡，其制备方法及应用

权利要求书

1.一种用于猪囊尾蚴病的上转发光颗粒检测卡，所述上转发光颗粒检测卡包括样品垫、结合垫、分析膜和吸水垫；所述分析膜上设置有检测线和质控线；

其特征在于，所述结合垫上包被有上转换发光颗粒标记的山羊抗猪IgG，所述检测线上包被有猪囊尾蚴活性蛋白GP50；

编码所述猪囊尾蚴活性蛋白GP50的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述的上转发光颗粒检测卡，其特征在于，所述猪囊尾蚴活性蛋白GP50的包被量为10～20mg，优选为12mg。

3.根据权利要求1所述的上转发光颗粒检测卡，其特征在于，所述结合垫上山羊抗猪IgG的包被量为5～15mg，优选10mg；所述结合垫上上转换发光颗粒的包被量为50～150mg，优选100mg。

4.根据权利要求1所述的上转发光颗粒检测卡，其特征在于，所述质控线包被有兔抗山羊IgG，所述兔抗山羊IgG的包被量为3～7mg，优选5mg。

5.如权利要求1～4任一项所述上转发光颗粒检测卡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、制备猪囊尾蚴活性蛋白GP50；

S2、制备上转换发光颗粒标记的山羊抗猪IgG；

S3、在检测线上固定所述猪囊尾蚴活性蛋白GP50，在质控线上固定兔抗山羊IgG，在结合垫上包被上转换发光颗粒标记的山羊抗猪IgG；

优选的，所述猪囊尾蚴活性蛋白GP50的溶液的浓度为1～5mg/mL，优选为2mg/mL；

更优选的，所述兔抗山羊IgG的溶液的浓度为30～80μg/mL，优选为50μg/mL；

进一步优选的，上转换发光颗粒标记的山羊抗猪IgG的溶液的浓度为0.3～1mg/mL，优选为0.5mg/mL。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述制备猪囊尾蚴活性蛋白GP50包括：

S11、提取囊尾蚴虫体总RNA；取囊尾蚴时期虫体总RNA混合后进行反转录，得到cDNA模板；

S12、采用如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示的引物进行扩增，获得如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；回收后与载体连接、转化、培养、抽提，获得重组质粒，并进行酶切鉴定；

S13、扩大培养，纯化，得到所述猪囊尾蚴活性蛋白GP50。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述制备上转换发光颗粒标记的山羊抗猪IgG，包括：

S21、活化上转换发光颗粒；

S22、将活化后上转换发光颗粒溶液与山羊抗猪IgG溶液，混合搅拌1～2h；加入BSA，反应15～30min；4～6℃13000rpm离心20～40分钟弃上清，即为上转换发光颗粒标记的山羊抗猪IgG；

优选的，活化后上转换发光颗粒溶液的浓度为0.2～1mg/mL，优选0.5mg/mL；

更优选的，山羊抗猪IgG溶液的浓度为0.2～1mg/mL，优选0.5μg/mL；

进一步优选的，活化后上转换发光颗粒溶液与山羊抗猪IgG溶液的体积比为1：20～100，优选1：50。

8.一种用于检测猪囊尾蚴病的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有如权利要求1～4任一项所述的上转发光颗粒检测卡和上样缓冲液；

优选的，所述上样缓冲液的组成为：含有质量体积比为2％的牛血清白蛋白、体积比为0.1％的吐温20和体积比为0.9％的聚乙二醇单辛基苯基醚的、浓度为0.03M的PBS溶液；所述上样缓冲液的pH为7.2。

9.如权利要求1～4任一项所述的猪囊尾蚴病抗体检测卡在囊尾蚴病检测中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，将待测血清用样品稀释液稀释后，加入到试纸条加样孔中，室温静置5～20min，将试纸条插入UPT生物传感器观察结果，根据T/C比值进行分析；

优选的，判定条件为：

阳性：在检测区及控制区各出现较高的峰，且cutoff＞0.375时，判定检测结果为阳性；

阴性：仅在控制区出现一个较高的峰，且cutoff＜0.375时，判定检测结果为阴性；

无效：控制区无较高峰出现，表明该次检测无效，重新进行加样检测。