[发明专利]一种同时检测石蒜属植物生物碱合成途径中14种代谢物的方法

权利要求书

1.一种同时检测石蒜属植物中生物碱合成途径中14种代谢物的方法，包括以下步骤：

将待测石蒜属植物样品和提取剂混合，进行提取，得到上机样品；

将所述上机样品进行液相色谱串联二级质谱检测；

所述液相色谱串联二级质谱检测的参数包括液相色谱检测参数和质谱检测参数：

所述液相色谱检测参数包括：

液相色谱柱：硅胶型色谱柱；所述硅胶型色谱柱为WatersUPLC HSST3柱；

进样量：5～10μL；

流速：0.2～0.3mL/min；

流动相包括流动相A和流动相B；所述流动相A为甲酸水溶液；所述流动相B为乙腈；

洗脱方法：梯度洗脱；

梯度洗脱的程序为：

0～1min：95％A；

1～5min：95～55％A；

5～7min：55～0％A；

7～8min：0％A；

8～8.1min：0～95％A；

8.1～10min：95％A；

质谱检测条件包括：

离子源：电喷雾离子源；

离子源喷雾电压：-4500～5500V；

扫描方式：正离子或负离子扫描下以多反应检测模式进行分析；

所述生物碱合成途径中14种代谢物包括苯丙氨酸、4-羟基桂皮酸、4-羟基苯甲醛、3,4-二羟基肉桂酸、反式桂皮酸、酪氨酸、酪胺、3,4-二羟基苯甲醛、降孤挺花啶、4’-O-甲基降孤挺花啶、去甲基加兰他敏、加兰他敏、石蒜碱和力可拉敏；

监测离子对包括：苯丙氨酸的母离子为m/z166±1Da；4-羟基桂皮酸的母离子为m/z163±1Da；4-羟基苯甲醛的母离子为m/z123±1Da；3,4-二羟基肉桂酸的母离子为m/z179±1Da；反式桂皮酸的母离子为m/z147±1Da；酪氨酸的母离子为m/z182±1Da；酪胺的母离子为m/z138±1Da；3,4-二羟基苯甲醛的母离子为m/z137±1Da；降孤挺花啶的母离子为m/z260±1Da；4’-O-甲基降孤挺花啶的母离子为m/z274±1Da；N-去甲基加兰他敏的母离子为m/z274±1Da、加兰他敏的母离子为m/z288±1Da；石蒜碱的母离子为m/z288±1Da；力可拉敏的母离子为m/z290±1Da。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测石蒜属植物样品的粒径为0.075～0.187mm。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述待测石蒜属植物样品通过冷冻干燥和研磨得到，所述冷冻干燥的温度为-50℃～-70℃，真空度为2～10Pa。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取剂为乙醇溶液；所述乙醇溶液的质量浓度为70～75％。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述待测石蒜属植物样品以干基计，所述待测石蒜属植物样品和提取剂的用量比为0.02g：(1～2)mL。

6.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于，所述提取在超声的条件下进行，所述超声的功率为200W，时间为28～40min。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述提取的次数≥2次。

8.根据权利要求1或7所述的方法，其特征在于，所述提取后，还包括将所得提取体系依次进行氮吹、复溶、稀释和过滤，得到所述上机样品；所述复溶的试剂为甲醇水溶液；所述甲醇水溶液中甲醇与水的体积比为1：3.5～4.5。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述甲酸水溶液的体积浓度为0.1～0.5％。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述监测离子对还包括：苯丙氨酸的子离子选自质荷比m/z为120±1Da；4-羟基桂皮酸的子离子选自质荷比m/z为119±1Da；4-羟基苯甲醛的子离子选自质荷比m/z为95±1Da；3,4-二羟基肉桂酸的子离子选自质荷比m/z为135±1Da；反式桂皮酸的子离子选自质荷比m/z为103±1Da；酪氨酸的子离子选自质荷比m/z为136±1Da；

酪胺的子离子选自质荷比m/z为121±1Da；3,4-二羟基苯甲醛的子离子选自质荷比m/z为108±1Da；降孤挺花啶的子离子选自质荷比m/z为138±1Da；4’-O-甲基降孤挺花啶的子离子选自质荷比m/z为137±1Da；N-去甲基加兰他敏的子离子选自质荷比m/z为213±1Da；兰他敏的子离子选自质荷比m/z为213±1Da；石蒜碱的子离子选自质荷比m/z为147±1Da；力可拉敏的子离子选自质荷比m/z为233±1Da。