[发明专利]一种具有底物选择性的肽组装水解酶的制备方法

权利要求书

1.一种具有底物选择性的肽组装水解酶的制备方法，包括以下步骤：

1)配制含短肽和印迹模板分子的混合液，超声分散，逐滴加入至氮气吹扫后的含有聚合物单体、交联剂、光引发剂的溶液中稀释，漩涡震荡，得到透明无色的混合物水凝胶，室温下避光静置一段时间后，在紫外光照射下开始聚合反应；

2)聚合结束后，离心收集产物，加入氢氧化钠溶液以降解印迹模板，加超纯水并反复除去上清液。将沉淀物用液氮速冷冻结，在真空干燥机中干燥，得到对特定底物具有选择性的肽组装人工水解酶。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所用的短肽为含组氨酸残基的2-10肽。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所用的印迹模板分子为肽组装水解酶预期催化底物：如对硝基苯酚乙酸酯(p-NPA)，对硝基苯酚丁酸酯(p-NPB)，对硝基苯酚己酸酯(p-NPH)等。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所用的聚合物单体为丙烯酰胺(Am)和N-异丙基丙烯酰胺(NIPAm)，交联剂为N,N'-亚甲基双丙烯酰胺(MBAm)，引发剂为偶氮二异丁脒盐酸盐(V-50)。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的短肽和印迹模板分子混合液，其中短肽浓度为10～100mmol/L，模板分子浓度为5～30mmol/L。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的氮气吹扫时间为20～40min。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的聚合物单体浓度为40～200mmol/L。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的交联剂浓度为20～200mmol/L。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的光引发剂浓度为0.5～2mmol/L。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的稀释至短肽浓度为2～5mmol/L。

11.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的避光静置预组装时间为12～48h。

12.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的聚合反应时间为1～4h。

13.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的氢氧化钠溶液浓度为1～20mmol/L。