[发明专利]一种泥蚶血红蛋白浓度高通量测定方法

说明书

本发明公开了一种泥蚶血红蛋白浓度高通量测定方法，通过特定稀释液使泥蚶血液形成一种稳定的、在某一吸光度下具有和其血红蛋白浓度呈线性关系的溶液，通过建立泥蚶血红蛋白浓度与吸光度的定量指标的数学线性回归模型，实现对泥蚶血红蛋白浓度的快速、高效测定。本发明高通量测定方法测定的泥蚶血红蛋白浓度与现有SLS‑Hb试剂盒的检测结果之间的误差小，标准曲线一旦建立，即可通过酶标仪进行吸光度检测，并根据标准曲线方便、快速地计算出待测的泥蚶血液的血红蛋白浓度，不需要和现有SLS‑Hb试剂盒一样每个样品等待一分钟，具有较广泛的应用推广价值。除了用于泥蚶血红蛋白浓度的快速高效测定外，也可以用于其它动物血红蛋白浓度的测定。

技术领域

本发明涉及属于生物领域，具体是一种泥蚶血红蛋白浓度高通量测定方法。

背景技术

泥蚶是我国传统四大养殖贝类之一，味道鲜美，营养丰富。作为少数具有红色血液的无脊椎动物，泥蚶拥有和人类结构相似的血红蛋白，富含易被人体吸收的卟啉铁，因此人们对泥蚶血红蛋白研究的关注度越来越高。泥蚶血红蛋白浓度的高通量测定方法对泥蚶血色性状形成机制研究和高血红蛋白含量泥蚶新品种培育提供技术保障。

采用市面上常见的SLS-Hb试剂盒测血红蛋白浓度时，受反应时间影响大，必须反应一分钟测定，这导致SLS-Hb试剂盒无法实现泥蚶血红蛋白浓度的高通量测定。而在现有文献中，目前还没有泥蚶血红蛋白浓度的高通量测定的相关方法报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术的不足，提供一种泥蚶血红蛋白浓度高通量测定方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种泥蚶血红蛋白浓度高通量测定方法，包括以下步骤：

(1)制备稀释液并检测溶有泥蚶血液的稀释液的吸收峰

(1-1)取20mL体积百分比浓度为1％的曲拉通溶液作为溶液A，加入烧杯中；

(1-2)取180mL质量百分比浓度为1.5％的氯化钠溶液作为溶液B，加入步骤(1-1)中装有溶液A的烧杯中，混合均匀，得到溶液C，溶液C即为稀释液；

(1-3)取部分稀释液，将随机选取的新鲜泥蚶血液和所取稀释液以1:20的体积比混合，得到溶有血液的稀释液，用分光光度计对该溶有血液的稀释液进行全波长扫描，测得该溶有血液的稀释液在540nm和580nm波长处有最高吸收峰；

(2)建立标准曲线

取N个血红蛋白浓度已知但不同的新鲜泥蚶血液样本，N为不小于5的正整数，分别用稀释液溶解血液样本，对每次溶解后得到的溶液，用分光光度计检测溶液的吸光度，再根据N个新鲜泥蚶血液样本的血红蛋白浓度和对应的吸光度建立血红蛋白浓度-吸光度标准曲线；

(3)泥蚶血液血红蛋白浓度的测量

(3-1)在干净的1.5mL离心管中加入1mL稀释液，再加入50μL待测的泥蚶血液，加入后用移液枪吹打均匀，静置一分钟，待泥蚶血液完全溶解，得到检测液；

(3-2)取200μL检测液加入酶标板中，测得该检测液在540nm处的吸光度Abs，根据步骤(2)中建立的标准曲线计算出待测的泥蚶血液的血红蛋白浓度。

本发明以1％的曲拉通溶液和1.5％的氯化钠溶液混合制备得到稀释液，该稀释液能快速溶解泥蚶血液，且溶有泥蚶血液的稀释液540nm和580nm波长处具有稳定的吸收峰，在540nm波长处的吸光度与泥蚶血液的血红蛋白浓度之间具有稳定的线性关系。