[发明专利]一种泥蚶血红蛋白浓度高通量测定方法

权利要求书

1.一种泥蚶血红蛋白浓度高通量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备稀释液并检测溶有泥蚶血液的稀释液的吸收峰

(1-1)取20mL体积百分比浓度为1％的曲拉通溶液作为溶液A，加入烧杯中；

(1-2)取180mL质量百分比浓度为1.5％的氯化钠溶液作为溶液B，加入步骤(1-1)中装有溶液A的烧杯中，混合均匀，得到溶液C，溶液C即为稀释液；

(1-3)取部分稀释液，将随机选取的新鲜泥蚶血液和所取稀释液以1:20的体积比混合，得到溶有血液的稀释液，用分光光度计对该溶有血液的稀释液进行全波长扫描，测得该溶有血液的稀释液在540nm和580nm波长处有最高吸收峰；

(2)建立标准曲线

取N个血红蛋白浓度已知但不同的新鲜泥蚶血液样本，N为不小于5的正整数，分别用稀释液溶解血液样本，对每次溶解后得到的溶液，用分光光度计检测溶液的吸光度，再根据N个新鲜泥蚶血液样本的血红蛋白浓度和对应的吸光度建立血红蛋白浓度-吸光度标准曲线；

(3)泥蚶血液血红蛋白浓度的测量

(3-1)在干净的1.5mL离心管中加入1mL稀释液，再加入50μL待测的泥蚶血液，加入后用移液枪吹打均匀，静置一分钟，待泥蚶血液完全溶解，得到检测液；

(3-2)取200μL检测液加入酶标板中，测得该检测液在540nm处的吸光度Abs，根据步骤(2)中建立的标准曲线计算出待测的泥蚶血液的血红蛋白浓度。

2.根据权利要求1所述的一种泥蚶血红蛋白浓度高通量测定方法，其特征在于，步骤(2)的具体操作如下：

(2-1)分别采用现有SLS-Hb试剂盒测得N个新鲜泥蚶血液样本的血红蛋白浓度n，单位为g/L；

(2-2)在N个干净的1.5mL离心管中分别加入1mL稀释液，再在每个离心管中加入一个新鲜泥蚶血液样本50μL，加入后用移液枪吹打均匀，静置一分钟，待泥蚶血液完全溶解，得到N个不同溶液样本；

(2-3)分别用酶标仪测得步骤(2-2)中得到的N个不同溶液样本在540nm处的吸光度Abs；

(2-4)根据N个新鲜泥蚶血液样本的血红蛋白浓度n和对应的吸光度Abs建立血红蛋白浓度-吸光度标准曲线：Abs＝0.0039n+0.0439，R²＝0.9941，血红蛋白浓度n的测定范围为10～60g/L。