[发明专利]一种钙离子拮抗剂代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种钙离子拮抗剂代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于检测钙离子拮抗剂的代谢相关基因CYP3A5*3和NPPA T2238C的基因多态性，试剂盒包括如下组分：CYP3A5*3扩增引物、CYP3A5*3测序引物、NPPA T2238C扩增引物、NPPA T2238C测序引物和阳性对照。

2.根据权利要求1所述的钙离子拮抗剂代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述CYP3A5*3扩增引物如序列表SEQ ID NO:1～2所示。

3.根据权利要求1所述的钙离子拮抗剂代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述NPPA T2238C扩增引物如序列表SEQ ID NO:3～4所示。

4.根据权利要求1所述的钙离子拮抗剂代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述CYP3A5*3测序引物如序列表SEQ ID NO:5所示，NPPA T2238C测序引物如序列表SEQ ID NO:6所示。

5.根据权利要求1所述的钙离子拮抗剂代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述所述测序引物为琼脂糖凝胶颗粒与氨基标记的DNA序列的结合物。

6.根据权利要求1所述的钙离子拮抗剂代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括扩增缓冲液、18mM醋酸镁、dNTPS、链置换DNA聚合酶、单链DNA结合蛋白、结合单链核酸的重组酶和海藻糖。

7.根据权利要求6所述的钙离子拮抗剂代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂2中各组分终浓度为：CYP3A5*3扩增前后引物各0.4uM，NPPA T2238C扩增前后引物各0.4uM，dNTPS 0.3mM，链置换DNA聚合酶1.2ng/μL，单链DNA结合蛋白3.2ng/μL，结合单链核酸的重组酶4.8ng/μL，海藻糖0.2％。

8.根据权利要求1所述的钙离子拮抗剂代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照包括浓度为20ng/ul的CYP3A5*3和NPPA T2238C杂合型基因组DNA。

9.一种采用根据权利要求1～8任一项所述的钙离子拮抗剂代谢标志物的检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：

a.将所述扩增反应液与5ul待测基因组DNA，采用多重RPA扩增进行扩增；

b.将10ul反应产物与3ul测序引物分别进行结合；

c.焦磷酸测序；

d.确定CYP3A5*3位点和NPPA T2238C位点的基因型。

10.一种采用根据权利要求1～8任一项所述的钙离子拮抗剂代谢标志物的检测试剂盒的应用，其特征在于，所述检测试剂盒用于体外检测待测样本中的CYP3A5*3和NPPA T2238C基因多态性。