[发明专利]一种nCas3单链核酸内切酶及其应用有效
| 申请号： | 202110638175.5 | 申请日： | 2021-06-08 |
| 公开（公告）号： | CN113528484B | 公开（公告）日： | 2022-02-25 |
| 发明（设计）人： | 彭文舫;郝怡乐 | 申请（专利权）人： | 湖北大学 |
| 主分类号： | C12N9/22 | 分类号： | C12N9/22;C12N15/55;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 蓝晓玉 |
| 地址： | 430062 湖北省武汉市武*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 ncas3 核酸 内切酶 及其 应用 | ||
1.一种nCas3单链核酸内切酶，其特征在于：所述nCas3单链核酸内切酶为在野生型Cas3蛋白的解旋酶功能域上引发突变，使野生型Cas3蛋白丧失解旋酶活性，只具备单链核酸酶活性的nCas3蛋白；
所述野生型Cas3蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述nCas3单链核酸内切酶为K458A、或D608A、或R887A；
所述K458A的氨基酸序列与SEQ ID NO.1相比，区别仅在于将第458位的“K”替换为“A”；
所述D608A的氨基酸序列与SEQ ID NO.1相比，区别仅在于将第608位的“D”替换为“A”；
所述R887A的氨基酸序列与SEQ ID NO.1相比，区别仅在于将第887位的“R”替换为“A”。
2.根据权利要求1所述的一种nCas3单链核酸内切酶，其特征在于：所述野生型Cas3蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述K458A的核苷酸序列与SEQ ID NO.2相比，区别仅在于将第1372-1373位的“aa”替换为“gc”；
所述D608A的核苷酸序列与SEQ ID NO.2相比，区别仅在于将第1823位的“a”替换为“c”；
所述R887A的核苷酸序列与SEQ ID NO.2相比，区别仅在于将第2659-2660位的“cg”替换为“gc”。
3.一种转化体，其特征在于：包含如权利要求2中所述的nCas3单链核酸内切酶的核苷酸序列。
4.根据权利要求3所述的一种转化体，其特征在于：所述转化体包括重组载体、表达盒、转基因细胞、重组菌中的任一种。
5.根据权利要求4所述的一种转化体，其特征在于：所述重组载体包含至少一个启动子。
6.如权利要求1所述的一种nCas3单链核酸内切酶在切割DNA单链中的应用。
7.如权利要求1所述的一种nCas3单链核酸内切酶在基因编辑中的应用。
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