[发明专利]三重数字微滴PCR检测猪圆环病毒的方法、引物、探针和试剂盒

说明书

本发明涉及防疫检测领域，尤其涉及一种三重数字微滴PCR检测猪圆环病毒的方法、引物、探针和试剂盒。检测靶点在检测猪圆环病毒中的应用，所述的检测为非疾病的检测与诊断方法，检测靶点包括以下检测靶点中的一种或多种：猪圆环病毒1型（PCV1）检测靶点的序列如SEQ ID NO:1所示；猪圆环病毒2型（PCV2）检测靶点的序列如SEQ ID NO:2所示；猪圆环病毒3型（PCV3）检测靶点的序列如SEQ ID NO:3所示。本发明基于ddPCR的优势，建立猪圆环病毒不同基因型的高灵敏、精确鉴别检测方法，可应用于常规动物检疫以及饲料、肉制品、疫苗等病毒含量低、基质复杂的动物源产制品的检疫监测和载量滴定。

技术领域

本发明涉及防疫检测领域，尤其涉及一种三重数字微滴PCR检测猪圆环病毒的方法、引物、探针和试剂盒。

背景技术

根据最新的OIE发布的《陆生动物卫生法典》，饲料、肉制品等动物源深加工产品被定义为传播动物疫病的重要风险点。猪圆环病毒作为二类传染疫病，主要分为猪圆环病毒1型、猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型，在全世界的养猪场里广泛传播。由于我国猪肉及其产品消费需求广泛，加上PCV2自身耐高温耐酸等特性，使得猪源性产制品成为传播PCV2的重要生物安全风险点。

实时荧光定量PCR(Real-timefluorescentquantitativePCR,qPCR)作为目前应用最为广泛的核酸检测方法，通过标准曲线可对样品中的病毒核酸进行检测定量。qPCR法在检测动物组织等常规样品时具有一定的优势，但动物源产制品，尤其是饲料、肉制品等深加工产品往往成分基质复杂，且含有大量抑制物，使得qPCR等常规方法受干扰程度较大，容易出现假阴性结果。数字微滴PCR(DigitaldropletPCR，ddPCR)通过乳化、微孔板、列阵芯片等方式获得大量的独立微小反应体系，使抑制剂以及其他杂质对扩增效率的影响大大削弱，提高了检测的稳定性和灵敏度，甚至可不处理样品直接进行ddPCR因其高灵敏度。强抗干扰性以及绝对定量等优点使得ddPCR近年来在艾滋病毒、乙型肝炎病毒、寨卡病毒及新型冠状病毒等人类病毒载量滴定，以及猪繁殖与呼吸综合征病毒、狂犬病毒等动物病毒的检测中已被证明具有很高的灵敏度以及特异性。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明基于ddPCR的优势，建立猪圆环病毒不同基因型的高灵敏、精确鉴别检测方法，可应用于常规动物检疫以及饲料、肉制品、疫苗等病毒含量低、基质复杂的动物源产制品的检疫监测和载量滴定。

本发明的一个目的是提供检测靶点在检测猪圆环病毒中的应用，所述的检测为非疾病的检测与诊断方法，检测靶点包括以下检测靶点中的一种或多种：

猪圆环病毒1型(PCV1)检测靶点的序列如SEQ ID NO:1所示；

猪圆环病毒2型(PCV2)检测靶点的序列如SEQ ID NO:2所示；

猪圆环病毒3型(PCV3)检测靶点的序列如SEQ ID NO:3所示。

进一步，本发明还提供了一种检测猪圆环病毒的检测靶点的引物，检测靶点包括以下检测靶点中的一种或多种：

PCV1的检测靶点的序列如SEQ ID NO:1所示；

PCV2的检测靶点的序列如SEQ ID NO:2所示；

PCV3的检测靶点的序列如SEQ ID NO:3所示。

优选，本发明的引物包括以下的一种或多种：

PCV1的检测靶点的引物

FP1：GGTGTGGCGGGAGGAGTAG

RP1：TTGGGTCCACTGTTGTTAT；

PCV2的检测靶点的引物

FP2：GAAATGGTATTTGGGTGCCC