[发明专利]一种表达人GM-CSF的重组溶瘤新城疫病毒及其应用

权利要求书

1.一种表达人GM-CSF的重组溶瘤新城疫病毒，其特征在于，所述表达GM-CSF的重组溶瘤新城疫病毒为向新城疫病毒溶瘤毒株Italien株的基因组中插入人GM-CSF的全长基因后获得，所述GM-CSF基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种权利要求1所述的表达人GM-CSF的重组溶瘤新城疫病毒的构建方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

S1，在CDS区上下游分别添加NDV转录调控序列GS和GE，在片段两端添加BsiWI酶切位点，然后经BsiWI酶切连接至基因组质粒pBR-rNDV位点，获得质粒pBR-rNDV-hGMCSF，转入工程菌中；

所述GS的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述GE的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

S2，BSR-T7/5经消化后转移至新的容器中，加入DMEM培养基培养，采用PEI转染试剂进行转染，转染完成后观察细胞生长状态，待出现细胞融合现象后表明病毒复活成功，重组病毒命名为rNDV-hGMCSF。

3.如权利要求2所述的表达人GM-CSF的重组溶瘤新城疫病毒的构建方法，其特征在于，S2中，所述DMEM培养基含体积分数10％胎牛血清和100μg/mL青链霉素。

4.如权利要求2所述的表达人GM-CSF的重组溶瘤新城疫病毒的构建方法，其特征在于，S2中，PEI转染试剂的浓度为1mg/mL。

5.如权利要求2所述的表达人GM-CSF的重组溶瘤新城疫病毒的构建方法，其特征在于，S2中，转染过程中，按照质粒的质量比pBR-rNDV-hGMCSF：pCI-NP：pCI-P：pCI-L＝2:1:1:1混合。

6.一种权利要求1所述的表达人GM-CSF的重组溶瘤新城疫病毒在制备肿瘤治疗药物中的应用。

7.如权利要求6所述的表达人GM-CSF的重组溶瘤新城疫病毒在制备肿瘤治疗药物中的应用，其特征在于，所述的表达人GM-CSF的重组溶瘤新城疫病毒能够单独用于制备肿瘤治疗药物。

8.如权利要求6所述的表达人GM-CSF的重组溶瘤新城疫病毒在制备肿瘤治疗药物中的应用，其特征在于，所述的表达人GM-CSF的重组溶瘤新城疫病毒能够联合其它治疗药物制备肿瘤治疗药物。

9.如权利要求8所述的表达人GM-CSF的重组溶瘤新城疫病毒在制备肿瘤治疗药物中的应用，其特征在于，其它治疗药物包括但不限于肿瘤的外科手术治疗药物、放射线治疗药物、化学治疗药物、抗体治疗药物、免疫细胞治疗药物、介入治疗药物、干细胞治疗药物。