[发明专利]一种多重信号放大系统及其在组织细胞病理检测中的应用

说明书

本发明涉及一种信号放大系统及其在组织、细胞病理检测中的应用。本发明提供一种利用多重信号放大系统进行组织、细胞病理检测抗原的方法，包括下述步骤：(1)组织切片、细胞涂片进行前期预处理后，进行抗原修复；(2)根据待测抗原种类，加入相应的抗体‑DNA/RNA连接链，作用一定时间，洗涤；(3)加入DNA/RNA放大链，作用一定时间；(4)加入DNA/RNA检测链，反应一定时间；(5)组织切片、细胞涂片洗涤后，抗淬灭剂封片；(6)对DNA/RNA检测链上的信号进行检测。本发明不仅解除了传统组织病理中抗体种属的限制，实现了同时进行多种或超多种抗原或抗体的同时检测，而且信号放大系统实现了超低丰度的待检测抗原或抗体，极大降低了检测限，提升了灵敏度等优点。

技术领域

本发明属于组织病理/细胞病理检测领域，具体涉及一种多重信号放大系统及其在组织、细胞病理成像中的应用。

背景技术

组织、细胞病理检测技术也被称之为免疫组化技术、免疫细胞化学技术，该技术均是根据抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶-底物沉积、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及相对定量的研究，根据病理样本的不同，可分为免疫组织化学技术(immunohistochemistry，简写IHC)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry，简写ICC)。根据显色方式的不同，可分为传统的明场染色-酶底物沉积显色(Brightfield,简写BF)和免疫荧光染色(Immunofluorescence,简写IF)，免疫荧光染色是将抗原或抗体标记荧光探针制成荧光标记物，再用这种荧光抗体(或抗原)作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光探针，利用荧光显微镜或组织切片扫描设备观察标本，荧光探针在激发光的照射而产生较强的荧光信号，看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术进行含量测定。

但是，现有的免疫荧光技术，存在抗体种属的限制，因此染色种类有限，针对于低丰度的抗原(或抗体)灵敏度很低，且针对一份样本染色种类较多时，实现难度大，过程复杂，时间长效率低，不容易实现自动化、容易出现串色的情况。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用多重信号放大系统进行组织、细胞病理检测的方法，包括下述步骤：

(1)组织切片、细胞涂片进行前期预处理后，进行抗原修复；

(2)根据待测抗原种类，加入相应的抗体-DNA/RNA连接链，作用一定时间，洗涤；

(3)加入DNA/RNA放大链，作用一定时间；

(4)加入DNA/RNA检测链，反应一定时间；

(5)组织切片、细胞涂片洗涤后封片；

(6)对DNA/RNA检测链上的信号进行检测。

本发明的优选技术方案中，步骤(1)中，组织切片、细胞涂片抗原修复后，室温自然冷却，洗涤并加入封闭液进行封闭。

本发明的优选技术方案中，步骤(2)中，所述洗涤为加入固定液固定后洗涤，再加入固定反应终止液反应后洗涤。

本发明优选的技术方案中，步骤(2)中，所述待检测抗原或抗体选自人、小鼠、羊、骆驼、兔、细菌、病毒的组织、细胞样本的任一种或其组合。

本发明的优选技术方案中，步骤(2)中，所述抗体-DNA/RNA连接链中，每个抗体分子连接一个或多个连接中间体。

本发明优选的技术方案中，所述抗体与连接中间体连接时使用巯基、氨基、羧基、羟基、腙基、炔基、叠氮基团、烯基中的任一种或其组合。

本发明的优选技术方案中，步骤(2)中，所述抗体-DNA/RNA连接链中，每个连接中间体连接一个或多个DNA/RNA连接链。