[发明专利]一种多糖的检测方法

说明书

本发明公开了一种多糖的检测方法。所述检测方法包括如下步骤：(1)将植物酵素样品依次经过淀粉酶酶解、蛋白酶酶解、核酸酶酶解和醇沉后得到多糖提取液；(2)配制系列标准品溶液，进行高效体积排阻色谱分析，构建相对分子质量校正曲线，并根据各标准品溶液的浓度及其峰面积计算得到标准品溶液的峰面积响应因子；(3)将步骤(1)的多糖提取液采用高效体积排阻色谱进行检测，根据所述多糖提取液的特征峰面积和步骤(2)得到的标准品溶液的峰面积响应因子计算多糖含量。本发明通过酶解去除测试样品中淀粉质和糊精类非特征性多糖以及蛋白类和核酸类生物大分子物质的干扰，再通过高效体积排阻色谱法分离检测特征性多糖含量，测试结果准确可靠。

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体涉及一种多糖的检测方法。

背景技术

多糖是食用植物酵素中规定的一个重要特征性质量指标，其多糖不包括淀粉质及糊精类。现有植物酵素行业标准QB/T 5323-2018关于多糖含量的测定方法，引用出入境检验检疫行业标准“SN/T 4260-2015出口植物源食品中粗多糖的测定苯酚硫酸法”。

现有的SN/T 4260-2015中测定多糖的方法，主要适用于食用菌、枣类、果汁等植物源食品中粗多糖含量的测定，其方法是将样品粉碎后利用80％乙醇在超声振荡条件下提取，除去小分子物质，再将不溶物质用水超声提取两次。再对水提取物用苯酚硫酸法测定多糖含量。苯酚硫酸法原理是用浓硫酸将多糖水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。但现有技术的样品处理方法不能排除淀粉质及糊精类多糖物质的干扰。而且苯酚硫酸法测定多糖含量首先需用系列不同浓度的葡萄糖标液制作吸光度-葡萄糖浓度标准曲线，据此标曲方程及样品的吸光度计算样品中多糖含量。因多糖大多是杂多糖，即一般由多种单糖组成，其中不同的单糖成分对于苯酚-硫酸法的响应值不同，故用单一葡萄糖的标准曲线计得的杂多糖含量结果偏差必然较大。

发明内容

针对上述现有技术的缺点，本发明提供一种多糖的检测方法。本发明所述多糖的检测方法可以避免淀粉质、糊精类物质、蛋白质和核酸类大分子物质的干扰，较准确地检测多糖含量，且检测结果可靠，重复性和稳定性好。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种多糖的检测方法，包括如下步骤：

(1)将植物酵素样品依次经过淀粉酶酶解、蛋白酶酶解、核酸酶酶解和醇沉后得到多糖提取液；

(2)配制系列标准品溶液，进行高效体积排阻色谱分析，构建相对分子质量校正曲线，并根据各标准品溶液的浓度及其峰面积计算得到标准品溶液的峰面积响应因子；

(3)将步骤(1)的多糖提取液采用高效体积排阻色谱进行检测，根据所述多糖提取液的特征峰面积和步骤(2)得到的标准品溶液的峰面积响应因子，计算所述植物酵素样品中多糖的含量。

本发明利用淀粉酶酶解的方法使植物酵素的淀粉质及糊精类物质完全水解为小分子葡萄糖，避免淀粉质及糊精类物质对特征性多糖含量测定的影响；同时，利用蛋白酶和核酸酶对测试样品进行进一步酶解处理，可以避免后续利用高效体积排阻色谱法测定时，可能存在的蛋白质和核酸类大分子物质的干扰；最后采用醇沉方法将多糖分离，经水溶得到多糖提取液，然后使用高效体积排阻色谱法分离测定，以示差折光检测器检测多糖含量，检测结果可靠，重复性和稳定性好。

作为本发明的优选实施方式，所述步骤(3)中，多糖提取液的特征峰面积为相对分子质量为3000以上的所有峰的总面积。

本发明经过科学理论检索和探索，超过20个单糖的聚合物称为多糖。若按20个单糖聚合的多糖计，假设其中六碳糖和五碳糖各占一半，则多糖的相对分子质量为2958，即近似为3000，因此，本发明限定相对分子质量为3000以上的所有峰为多糖的特征峰。