[发明专利]用于胞嘧啶碱基编辑的融合蛋白及其应用

权利要求书

1.融合蛋白，其包含a)Cas酶域；b)不稳定结构域(DD)；c)胞嘧啶脱氨酶域(CDA)以及d)尿嘧啶糖苷酶抑制剂(UGI)域；

从N端到C端，其选自以下融合方式中的任意一种：

(1)Cas-DD-CDA-UGI；

(2)Cas-CDA-DD-UGI；

(3)Cas-DD-CDA-DD-UGI；

其中“-”代表任选的连接肽；

所述Cas酶域为Cas9；

所述胞嘧啶脱氨酶域是来自海七鳃鳗(Petromyzonmarinus)的胞苷脱氨酶1(pmCDA1)；

所述不稳定结构域(DD)的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，所述Cas酶域的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.组合物，其包含权利要求1或2所述融合蛋白、与所述Cas酶域结合的引导RNA以及trimethoprim。

4.宿主细胞，其含有权利要求3所述的组合物，并且其基因组中含有所述引导RNA所识别的靶序列。

5.根据权利要求4所述的宿主细胞，其为真核细胞。

6.分离的核酸，其表达权利要求1或2任一项所述融合蛋白。

7.根据权利要求6所述核酸，其由至少两段独立的核酸片段A和B组成，并包含用于表达intein内含肽的核酸片段；

其中片段A中，SEQ ID NO：2所示核酸序列的3'端与用于表达intein内含肽N端的核酸片段的核酸片段连接；

片段B中，SEQ ID NO：3所示核酸序列的5'端与用于表达intein内含肽C端的核酸片段的核酸片段连接；

当所述核酸在真核细胞表达时，所述intein内含肽可以被切除，并且片段A和片段B连接得到所述融合蛋白。

8.载体，其含有权利要求6或7所述的核酸，以及任选的引导RNA。

9.根据权利要求8所述的载体，所述载体中包含AAV载体。

10.改变基因产物表达的方法，其包括：

将权利要求6或7所述的核酸，或权利要求8或9所述载体导入宿主细胞并在trimethoprim存在的条件下表达出所述融合蛋白并与引导RNA配合以改变基因产物的表达。

11.递送系统，其包括i)权利要求1或2任一项所述融合蛋白、或权利要求6或7所述的核酸，或权利要求8或9所述载体；ii)引导RNA以及iii)递送媒介物。

12.药物组合物，其包含权利要求11所述的递送系统以及药学上可接受的载体。