[发明专利]检测四唑虫酰胺及其代谢物残留量的方法及其应用

权利要求书

1.一种检测四唑虫酰胺及其代谢物残留量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、取待测样品加水，以使待测样品含水量大于75％，加入提取剂进行提取，再进行盐析，盐析后固液分离，收集滤液，萃取，浓缩，获得提取液，再利用分散固相萃取剂对提取液中的基质进行净化处理，获得供试溶液；

S2、取不含四唑虫酰胺及其代谢物的同种类基质的空白样品，按照步骤S1进行处理，得到空白样品基质溶液，向空白样品基质溶液中加入四唑虫酰胺及其代谢物标准品以配制得标准溶液，最终配制成含有四唑虫酰胺及其代谢物至少5个梯度浓度的基质标准工作溶液；

S3、定性检测，将步骤S2中的至少5个梯度浓度的基质标准工作溶液和步骤S1的供试溶液进样，用HPLC-MS/MS检测，根据色谱峰保留时间和特异性离子对信息进行定性验证；

S4、定量检测，将步骤S2中的至少5个梯度浓度的基质标准工作溶液进样，用HPLC-MS/MS检测，绘制四唑虫酰胺及其代谢物的基质标准曲线，将步骤S1的供试溶液进样，用HPLC-MS/MS检测，以外标法计算供试溶液中四唑虫酰胺及其代谢物的含量。

2.根据权利要求1所述的检测四唑虫酰胺及其代谢物残留量的方法，其特征在于，

所述提取剂包括色谱纯乙腈或含0.1％乙酸的色谱纯乙腈，所述含0.1％乙酸的色谱纯乙腈的为1000mL色谱纯乙腈中含有1mL纯度为99.9％的色谱纯乙酸；

所述盐析采用NaCl和MgSO₄进行盐析处理；

所述分散固相萃取剂采用N-丙基乙二胺固相吸附剂(PSA，primary secondary aminesorbent)。

3.根据权利要求2所述的检测四唑虫酰胺及其代谢物残留量的方法，其特征在于，

步骤S1的具体步骤包括：取待测样品加水，以使待测样品含水量大于75％，涡旋混匀至少30s，加入提取剂进行提取，涡旋混匀至少2min，再进行盐析，涡旋混匀至少1min，采用离心进行固液分离，离心的转速为4500r/min～5500r/min，时间为3min～7min，收集上清液，萃取提取层，于40℃～50℃水浴旋转蒸发浓缩，获得提取液，利用分散固相萃取剂对提取液中的基质进行净化处理，再进行离心处理，离心处理的转速为11000r/min～13000r/min，时间为3min～5min，获得供试溶液。

4.根据权利要求3所述的检测四唑虫酰胺及其代谢物残留量的方法，其特征在于，

在获得供试溶液之前，还包括对离心处理后的上清液过0.22μm的有机滤膜。

5.根据权利要求1所述的检测四唑虫酰胺及其代谢物残留量的方法，其特征在于，

步骤S3中进行定性验证的具体步骤包括：比较供试溶液与基质标准工作溶液保留时间是否一致，以及在扣除背景后的供试溶液质谱图中，观察定量离子和定性离子是否具有明显色谱峰，而且定量离子和定性离子的离子丰度比与相近浓度的基质标准工作溶液的离子丰度比是否一致，一致则判断供试溶液中存在四唑虫酰胺及其代谢物的残留，若两个条件不能同时满足，则判断供试溶液中不存在四唑虫酰胺及其代谢物的残留。

6.根据权利要求5所述的检测四唑虫酰胺及其代谢物残留量的方法，其特征在于，

步骤S3中HPLC-MS/MS的高效液相色谱的检测条件为：

色谱柱：ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18色谱柱，100mm×3.0mm，1.8μm；

柱温箱温度：28℃～42℃；

流动相：A相为乙腈，B相为0.1％甲酸水溶液，流动相采用线性梯度洗脱；

流速：0.3mL/min～0.5mL/min；

进样量：5μL。