[发明专利]一种抗菌脂肽类化合物的制备方法

权利要求书

1.一种抗菌脂肽类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、取枯草芽孢杆菌菌株，接种于斜面LB培养基上，于30℃培养24h，挑取单菌落，接种于液体LB培养基，于30℃摇瓶培养16-18h，得到枯草芽孢杆菌活化液，所述枯草芽孢杆菌活化液的OD₆₀₀为0.8-1.0；

步骤二、将枯草芽孢杆菌活化液接种于发酵培养基中，所述枯草芽孢杆菌活化液的接种量为4-8％，于28-32℃，150-210r/min旋转条件下发酵培养36-60h，得到发酵液；

步骤三、将所述发酵液离心，得到发酵上清液；

步骤四、调节所述发酵上清液的pH＝2，静置2-8h，离心收集沉淀；再用甲醇反复抽提，使用旋转蒸发仪干燥其抽提液，得到抗菌脂肽类化合物脂肽提取物。

2.根据权利要求1所述的抗菌脂肽类化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，所述LB培养基由如下质量百分比的组分组成：胰蛋白胨1％、酵母浸粉0.5％、氯化钠1％，所述LB培养基的pH值为7.2-7.4。

3.根据权利要求1所述的抗菌脂肽类化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤二中，发酵培养基由如下质量百分比的组分组成：糖0.5％-2.5％、蛋白胨0.5％-3％、金属离子化合物以金属离子计0.01％-1％，所述金属离子为锌离子、钾离子、镁离子、锰离子中的一种或多种，所述糖为葡萄糖、蔗糖、甘油中的一种或多种，所述蛋白胨为胰蛋白胨、牛骨蛋白胨、大豆蛋白胨中的一种或多种，所述发酵培养基的pH值为6.0-8.0。

4.根据权利要求1所述的抗菌脂肽类化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤三中，离心转速为4000-10000r/min，离心时间为10-20min。

5.根据权利要求1所述的抗菌脂肽类化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤四中，离心转速为4000-10000r/min，离心时间为5-15min。

6.根据权利要求1所述的抗菌脂肽类化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤四中，使用4-8mol/L的HCl溶液调节发酵上清液的pH值。

7.根据权利要求1所述的抗菌脂肽类化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤四中，旋转蒸发仪干燥温度为50-70℃。

8.根据权利要求1所述的抗菌脂肽类化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤二中，枯草芽孢杆菌活化液的接种量为5％。

9.根据权利要求3所述的抗菌脂肽类化合物的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基由如下质量百分比的组分组成：糖1％、蛋白胨1.5％、金属离子化合物以金属离子计0.54％。

10.根据权利要求3所述的抗菌脂肽类化合物的制备方法，其特征在于，所述钾离子以磷酸氢二钾的形式添加，所述镁离子以硫酸镁的形式添加，所述锰离子以硫酸锰的形式添加。