[发明专利]农产品黄曲霉毒素分子预警方法

权利要求书

1.农产品黄曲霉毒素分子预警方法，其特征在于：测定农产品样品中黄曲霉毒素预警分子浓度：当测定的黄曲霉毒素预警分子浓度小于0.2 μg/g时，黄曲霉毒素污染水平在1.0μg/kg以下，为低风险；当测定的黄曲霉毒素预警分子浓度大于1.2 μg/g时，黄曲霉毒素污染水平在10μg/kg以上，为高风险；当测定的黄曲霉毒素预警分子浓度在0.2 μg/g~1.2 μg/g时，为中风险，所述的黄曲霉毒素预警分子为AFT-YJFZ01肽，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的预警方法，其特征在于：采用黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01免疫快速检测方法定量检测农产品样品中AFT-YJFZ01的浓度，其方法步骤为：

制备待测农产品样品待测液，加入到孔底包被有黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的纳米抗体或单克隆抗体的酶标板孔中，反应，洗板；

加入黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01多克隆抗体反应，洗板；

加入与黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01多克隆抗体发生结合反应的辣根过氧化物酶标记抗体，反应，洗板；

加入显色液反应；

加入终止液，酶标仪读取并计算待测样品中AFT-YJFZ01的浓度。

3. 根据权利要求2所述的预警方法，其特征在于：以每孔100-200 μL加入到孔底包被有黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的纳米抗体或单克隆抗体的酶标板孔中，放置室温或37℃反应不少于1 h后，弃去反应后液体，洗涤酶标板，然后加入AFT-YJFZ01兔源多克隆抗体，再每孔加入100-200μL，放置室温或37 ℃反应不少于1 h后，弃去液体，再液洗涤酶标板，然后每孔加入辣根过氧化物酶标记羊抗兔抗体100-200μL，放置室温或37 ℃反应不少于1 h后，弃去液体，再洗涤酶标板，然后先后加入显色液、终止液，最后通过酶标仪读取并计算待测样品中AFT-YJFZ01的浓度。

4.根据权利要求2所述的预警方法，其特征在于：用系列浓度的起标准物质作用的预警分子AFT-YJFZ01纯品溶液，替换待测液，用于制作标准曲线，计算得到待测样品中AFT-YJFZ01的浓度。

5.根据权利要求2所述的预警方法，其特征在于：制备待测农产品样品待测液，其方法步骤为：称量待测的农产品样品，粉碎后转移至样品稀释液中，常规方法匀浆后静置，取上清即可制成待测样品待测液。

6. 根据权利要求5所述的预警方法，其特征在于：所述的样品稀释液是指含有0.1%山梨醇和绵糖的0.01 mol/L 磷酸盐缓冲液，配制方法为：山梨醇与绵糖各0.5 g、NaCl 4.0g、Na₂HPO₄·12H₂O 1.45 g、KCl 0.1g、KH₂PO₄ 0.1 g，加入去离子水定容至500 mL。

7. 根据权利要求2所述的预警方法，其特征在于：所述的孔底包被有黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的纳米抗体或单克隆抗体的酶标板，其制备方法为：将AFT-YJFZ01的纳米抗体或单克隆抗体溶解在ELISA包被缓冲液中，形成0.2-8.0 μg/mL的包被液，再加入至酶标板中，4 ℃放置过夜或者37 ℃放置不少于2 h后，去除上述酶标板中包被液，再用ELISA常规洗液洗涤酶标板；然后加ELISA常规封闭液，放置室温或37 ℃封闭不少于1 h后，再弃去封闭液，再用ELISA常规洗液洗涤酶标板。

8.根据权利要求2所述的预警方法，其特征在于：所述的显色液是指ELISA常规的双氧水与TMB显色液。

9.根据权利要求2所述的预警方法，其特征在于：所述的终止液是指ELISA常规的显色终止液2mol/L硫酸水溶液。