[发明专利]一种提高GFAP蛋白表达量的基因及其可溶性表达方法

权利要求书

1.一种GFAP-opt基因，其核苷酸序列如SEQ.ID.No.2所示。

2.权利要求1所述基因在提高GFAP蛋白表达量中的作用。

3.一种pGEX-4T-2表达载体，其表达权利要求1所述的基因。

4.权利要求3中的载体，其进一步包括OmpA信号肽。

5.权利要求4中的载体，所述OmpA信号肽的核苷酸序列如SEQ.ID.No.3所示。

6.权利要求4或5中的载体在提高GFAP蛋白可溶性表达中的作用。

7.一种提高GFAP蛋白表达量的方法，其特征在于：使用权利要求3中的载体表达GFAP蛋白。

8.一种提高GFAP蛋白可溶性表达的方法，其特征在于：使用权利要求5中的载体表达GFAP蛋白。

9.一种提高GFAP蛋白表达量的方法，其特征在于：用软件OptimumGeneTM分析编码GFAP蛋白的基因序列SEQ ID NO.1，找出其密码子使用偏好以及大肠杆菌使用偏好不同的位点，对于使用偏好不同的密码子位点，用大肠杆菌偏好的密码子替代，设计出密码子优化的GFAP蛋白基因序列SEQ ID NO.2，上述密码子优化的基因序列所编码的蛋白氨基酸序列与原有的氨基酸序列一致，上述密码子优化的基因序列由上海生工生物工程有限公司合成，装入载体pGEX-4T-2，构建成重组质粒pGEX-4T-2-GFAP-opt并表达。

10.一种提高GFAP蛋白可溶性表达的方法，其特征在于，提供OmpA信号肽序列：SEQ IDNO.3(MKKTAIAIAVALAGFVTVAQA)，用引物OmpA-F(GATCCATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCAGGTTTCGTCACCGTCGCTCAGGCTGG)和OmpA-R(AATTCCAGCCTGAGCGACGGTGACGAAACCTGCCAGTGCCACTGCAATCGCGATAGCTGTCTTTTTCTG)经过退火合成DNA片段，并将所述pGEX-4T-2-GFAP-opt用限制性内切酶BamHI和EcoR1进行双酶切，获得线性化的pGEX-4T-2-GFAP-opt线性片段作为插入载体，酶切反应体系为：10×酶切Buffer 2μl，pGEX-4T-2-GFAP-opt质粒1μg，EcoRI 1μl，BamHⅠ1μl，补水至20μl，37℃，1h，构建得到重组质粒pGEX-4T-2-OmpA-GFAP-opt并表达。