[发明专利]一种基于金团簇和TMB比色荧光双信号检测抗坏血酸的方法

说明书

本发明公开了一种基于荧光及比色双信号检测抗坏血酸的方法，属于荧光分析检测技术领域。现有大多采用单一荧光或比色检测坏血酸，存在着背景信号干扰大、环境波动大的问题。本发明检测方法先将TMB溶液和纳米MnO₂混合后进行氧化孵育，孵育完成后过滤去除纳米MnO₂，得到蓝色oxTMB溶液，将oxTMB溶液、AuNCs溶液、含AA待测溶液混合反应，基于荧光内滤效应，通过测定相对荧光强度和紫外吸收强度检测AA。本发明不需要昂贵的仪器和专业培训的人员来进行操作即可检测，同时具有省时省力，具有检测限低，准确性好，简单快速检测的优点。

技术领域

本发明属于荧光分析检测技术领域，具体涉及一种基于金团簇和TMB比色荧光双信号检测抗坏血酸的方法

背景技术

抗坏血酸，又称为维生素C，在维持人体的正常代谢中起着非常重要的作用它有很强的还原能力，是人体中一种重要且高效的抗氧化剂。此外，抗坏血酸在促进人胶原蛋白和神经递质的合成、促进抗体的形成和铁离子的吸收等过程中具有不可替代的作用。抗坏血酸还具有清除自由基和预防各种疾病的能力。当人体严重缺乏抗坏血酸时，就会引起坏血病。由于人类无法自主合成抗坏血酸，抗坏血酸主要从食品或保健药物中获得。因此，它已成为一种常见的添加剂，并广泛应用于食品、医药、化妆品等领域。由于抗坏血酸在日常生活中的临床和生物学意义，有必要开发一种快速、灵敏的抗坏血酸检测方法，用于化学分析和临床疾病诊断。

到目前为止，已经建立了大量检测抗坏血酸的方法，包括荧光法、比色法和电化学方法。在这些方法中，荧光法和比色法因其工艺简单、操作简单、成本低、设备相对简单等优点而受到广泛关注。但在这些方法中，大多采用单一荧光或比色检测手段，存在着背景信号干扰大、环境波动大的问题。因此，多信号传感系统近年来受到了广泛的关注。

发明内容

本发明解决的技术问题是现有单一的荧光或比色检测抗坏血酸，背景信号干扰大、环境波动大。

本发明为解决上述技术问题，采用的技术方案是提供一种基于金团簇和TMB比色荧光双信号检测抗坏血酸的方法，将TMB溶液和纳米MnO₂混合后进行氧化孵育，孵育完成后过滤去除纳米MnO₂，得到蓝色oxTMB溶液，将oxTMB溶液、AuNCs、AA混合反应，基于荧光内滤效应，通过测定相对荧光强度和紫外吸收强度检测AA含量。

其中，AuNCs具有荧光，且其荧光发射光谱与oxTMB的特征吸收光谱有重叠部分。

其中，AuNCs荧光光谱的最大激发波长和最大发射波长分别为410nm和572nm。

其中，AuNCs是以HAuCl₄·4H₂O为原料、谷胱甘肽为稳定剂制得。

具体的，氧化孵育具体为将3ml TMB溶液(2mM)和600μL MnO2纳米片(4mg/mL)悬液依次加入80mL pH为4的HAc-NaAc(0.2mM)缓冲溶液中，搅拌并在室温下孵育1小时后，将混合物过滤去除MnO₂纳米片。

具体的，将200μL AuNCs(200μM)、1mL oxTMB(72μM，由TMB转化而来)和AA溶液混合在一起室温反应。

本发明检测方法具体可按如下步骤进行：

(1)配制浓度梯度为0-200μM的抗坏血酸标准溶液；

(2)将200μL AuNCs(200μM)、1mL oxTMB(72μM，由TMB转化而来)和上述不同浓度的AA标准溶液混合在一起室温反应，分别记录不同AA浓度下溶液在572nm和652nm处的荧光发射峰和紫外吸收峰，将两种峰值变化与对应的抗坏血酸浓度进行线性拟合得到线性方程，建立荧光检测抗坏血酸标准曲线和比色检测抗坏血酸标准曲线；